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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

你知道人臍靜脈內皮細胞的培養過程嗎?

時間:2021-10-24 閱讀:512
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  人臍靜脈內皮細胞細胞株培養問題:
  Q1. 人臍靜脈內皮細胞液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?
  要冷藏!!因為液體培養基經冷凍后再經溶化時,其溶液的pH值會發生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。
  Q2.人臍靜脈內皮細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。
  幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求,細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質,在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的谷氨酰胺。基礎醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中,其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色,-24C保存。
  人臍靜脈內皮細胞培養過程:
  HUVEC為原代細胞,除復蘇、凍存過程中與常規細胞系如293T等貼壁細胞雷同外,需主要注意的是培養液放置溫度、Trypsin消化細胞過程。
  1)培養液放置溫度:細胞代理銷售公司技術推薦在使用前30min室溫(25-27℃)中放置配制好的培養液,用臉貼培養瓶而感覺到不冷(即接近人體溫)即可使用。Trypsin/EDTA solution、TrypsinNeutralizer solution可同樣處置。
  2)Trypsin消化細胞過程:加入4mL Trypsin/EDTA solution/ 25cm2 flask后晃
  動3次,吸棄3mL Trypsin/EDTA,室溫中作用1-3mins,顯微鏡下觀察細胞變圓、脫離培養皿即可加入3mL Trypsin Neutralizer solution進行終止作用。
  3)轉移細胞至15mL離心管中,1000rpm 離心5mins,棄上清,加入新鮮的培養液轉移至新的培養皿/瓶。
  4)復蘇、凍存雷同其他細胞操作,細胞復蘇、傳代后不可多次傳代,一次復蘇的細胞盡量滿足連續性試驗需要。

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