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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: BrdU標記法檢測原代細胞增殖

時間:2021-10-28 閱讀:261
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PriCells: BrdU標記法檢測原代細胞增殖                                                      

1.細胞以1.5×105/ml細胞接于直徑35ml培養皿中(內放置蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕數細胞處于G0期
2.終止細胞培養,加入BrdU(終濃度30μg/L),37℃,孵育40min。
3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。
4.甲醇/醋酸固定10min。
5.經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6.5%正常兔血清封閉。
7.甲酰胺100℃,5min變性核酸。
8.冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。
9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。

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