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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 密度阻滯法純化人外周血單核細胞

時間:2021-11-2 閱讀:271
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PriCells: 密度阻滯法純化人外周血單核細胞                                                


試劑和器材: 
1. 抗凝血劑:100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉;
2. Hepes緩沖生理鹽水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;
3. 淋巴細胞分離液(例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077)或OptiPrepTM,用Hepes緩沖生理鹽水稀釋(分別加入5倍體積和17倍體積);
4. 臺式低速離心機;
5. 巴斯德吸管(短型和長型);
6. 5—10ml規(guī)格注射器和金屬套管針;


實驗方法:
1. 用乙二胺四乙酸(2mmol/L終濃度)或檸檬酸鈉(38g/L終濃度)作為抗凝劑來收集靜脈血;
2. 用等體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋血液,反復(fù)多次輕輕顛倒;
3. 用塑料巴斯德吸管,取6ml稀釋過的血液加入到離心管中3ml的選定介質(zhì)之上;
4. 20℃,以700g離心15min(LymphoprepTM)或700g離心20min(NycoPrepTM1.077或碘克沙醇溶液);
5. 用緩慢減速程序或不制動的方法使轉(zhuǎn)子減速;
6. 用巴斯德吸管在界面上收集細胞;
7. 用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋并且以200g—500g離心15min收集細胞;



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