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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 原代細胞核仁的制備

時間:2021-11-4 閱讀:258
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PriCells: 原代細胞核仁的制備                                                                                        


試劑和器材: 
1. 懸浮緩沖液:0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5;
2. 密度阻滯溶液:0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5;
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制劑;
4. 吊桶式低溫低速或高速離心機;
5. 超聲發(fā)生器;
6. 光學顯微鏡(相差或普通光學顯微鏡);


實驗方法:
   所有操作須在0—4℃完成。
1. 將純化的原代細胞細胞核溶于懸浮緩沖液中;
2. 超聲處理懸液10—15s,中間間隔30—40s;
3. 用1g/L美藍染色,通過相差或普通光學顯微鏡監(jiān)測核的破裂。通常原代細胞細胞核*破裂需要40—60s的超聲處理;
4. 在離心管中,將超聲處理物加入到一半體積的密度阻滯溶液上,2000g離心20min并收集核仁沉淀;

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