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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

哺乳動物原代細胞培養的β-半乳糖苷酶(分光光度測定)

時間:2021-11-5 閱讀:341
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PriCells: 哺乳動物原代細胞培養的β-半乳糖苷酶(分光光度測定)                               


試劑和器材: 
1.反應緩沖液:5g/L聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、0.05mol/L檸檬酸鈉-磷酸鹽緩沖液,pH4.3;
2.終止液:0.25%甘氨酸-NaOH,pH10;
3.底物:6mmol/L對硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于緩沖溶液中;
4.微量離心機,帶1.5—2.0ml小管;
5.分光光度計(可見波長)帶1ml比色皿;

紫外-可見分光光度法測定酶活
酶活測定:以ONPG為底物測定β-半乳糖苷酶活力。
酶活定義:以ONPG為底物,37℃保溫酶解,每分鐘釋放lμmol/L鄰硝基酚的酶量,定義為1個酶活力單位。


實驗方法:
1.每次檢測,將0.5ml底物與沉淀于微量離心小管中的膜組分或50μl膜的混懸液混合;
2.如第1步設置空杯樣,立即加入終止(緩沖液)1ml;
3.37℃孵育檢測液30min;
4.加入1ml的終止(緩沖液)到檢測液中;
5.在微量離心機中離心1—2min,去除任何沉淀物質;
6.讀出在410nm波長下檢測液相對于空白樣的吸光值;


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