??BNL CL.2小鼠胚胎肝細胞

細胞介紹
在用鳥氨酸和苯丙氨酸代替精氨酸和酪氨酸的平板上選擇建立了這株細胞。檢測表明肢骨發育畸形病毒(鼠痘)陰性。
 
細胞特性
1） 來源：小鼠肝
2） 形態：上皮細胞樣
3） 含量：>1x10^6 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
 
BNL CL.2小鼠胚胎肝細胞

運輸和保存

（1）使用T25瓶充液發送活細胞。

（2）收到細胞后，請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態，并將T25瓶置于培養箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態。若狀態良好，可進行細胞后續處理操作，按照以下方式進行。若發現可疑污染物，請及時與我們取得聯系。
 
細胞用途：僅供科研使用。
                       
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(DMEM-H，GIBCO，貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%，添加1% PS。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
 ??