傳統細胞計數和活力分析：細胞染色

傳統上，細胞計數和活力分析是通過對細胞進行染色來進行的。DAPI (4', 6-diamido-2-phenylindole) 和 Hoechst 是細胞計數常用的染色劑或染料。它們染色活細胞和死細胞的細胞核并呈現 藍色。  

細胞活力染色 的一個常見例子 包括：

用綠色染料 (Calcein AM)染色的活細胞和

帶有紅色染色的死細胞（碘化丙啶）

現在有一系列細胞活力染料可供選擇，包括用于死細胞的臺盼藍（藍色染料）和用于死細胞的赤蘚紅 B（粉紅色染料）。  

細胞染色問題：

• 耗時：  細胞染色的手動步驟。根據使用的細胞染色試劑盒或染料，完成細胞染色的樣品制備可能需要長達一小時。

• 染色劑會影響細胞功能： 添加染色劑本身會影響細胞功能。  

血細胞計數/血細胞計數

血細胞計數是計數室，它們已被細胞生物學家使用超過 100 年。盡管近引入了半自動化方法，例

如此處描述的方法（即圖像分析和流式細胞術）；血細胞計數仍然是全球許多細胞生物學實驗室的支柱。

但是基于血細胞計數的細胞計數反復出現的挑戰導致這些方法逐漸被替代。

血細胞計數細胞計數的挑戰：

• 人為錯誤：  手動計數意味著這在過程的多個階段是不可避免的，包括混合、處理和稀釋。  

• 耗時：  由于該過程的手動性質，它不適合大規模分析或需要高通量細胞分析的過程。

• 重現性差：由于需要多次計數以確保一致性，因此通常會導致重現性差，尤其是在細胞樣本的

• 用戶

• 對用戶測試中。

• 材料變化：  由于這是一種 DIY 方法，每個研究人員將使用不同的緩沖液、不同的移液器，這些差異

• 可能會導致更多不必要的錯誤。

基于圖像的分析

隨著近年來計算機處理能力的提高，基于計算機的圖像流式細胞儀的興起也是如此。借助更強大的機器學習和圖像分析算法，計算機現在可以定量分析細胞圖像，檢測人眼可能無法檢測到的特征。依賴這種方法的儀器包括數碼相機（拍攝細胞圖像）和分析圖像的計算機程序。相機必須拍攝具有“細胞聚焦" 的高質量圖像 - 高質量的圖像更容易讓計算機算法進行分析。因此，這些設備通常 具有手動對焦或自動對焦設置 - 這在拍攝圖像之前確保細胞處于焦點位置。為了確保在相機前正確呈現細胞樣本，這些儀器通常使用儀器專用的專業載玻片或墨盒。

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