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愛帕琳肽12(AP12)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

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ELISA簡介

ELISA原理

隨著酶標記術的發(fā)展，將抗體與酶連接來提高其特異性和靈敏度變得十分流行。1971年瑞典學者Engvall和Perlmann，荷蘭學者Van Weeman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，稱為酶連免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）。ELISA已被證明在蛋白與核酸檢測中十分有用的一種技術。

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的靈敏度。

ELISA的類型

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三分必要的試劑：⑴固相的抗原或抗體，即“免疫吸附劑"(immunosorbent)；⑵酶標記的抗原或抗體，稱為“酶連物"、“結合物"(conjugate)；⑶酶反應的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。

絕大多數(shù)ELISA使用以下幾種策略：

1. 間接ELISA（Indirect ELISA）: 用于篩檢抗體（抗特定抗原成分的特異性抗體）。此法是測定抗體常用的方法。

2. 夾心ELISA（Sandwich ELISA）: 用于檢測目的抗原的量。其優(yōu)點是避免了對特異性抗體的直接標記，但增加了操作步驟和測定時間。

3. 競爭ELISA（Competitive ELISA）: 用于確定抗原特異性或待檢標本中含交叉反應成分時為了提高實驗的特異性而使用的一種方法。根據(jù)標記抗原與同種未標記待測抗原與抗體間發(fā)生競爭性結合的原理，主要用于測定小分子抗原。

4. ABS-ELISA法，ABS為親和素(avidin）生物素(biotin)系統(tǒng)(system)的略語。親和素是一種糖蛋白，分子量60000，每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成。