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土壤木質(zhì)素過氧化物酶(Soil lignin peroxidase,S-Lip)試劑盒說明書

閱讀:1036      發(fā)布時(shí)間:2023-09-26
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土壤木質(zhì)素過氧化物酶(Soil lignin peroxidase,S-Lip)試劑盒說明書

 

 微量法100T/48S

 

注    意 :正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

木質(zhì)素過氧化物酶(EC1.11.1.14)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,屬于木質(zhì)素降解酶系,在木質(zhì)素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉(zhuǎn)化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應(yīng)用潛力。

 

測定原理:

木質(zhì)素過氧化物酶氧化藜蘆醇生成藜蘆醛,在310nm處有特征吸收峰。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。                    

 

樣品處理:

新鮮土樣風(fēng)干,過30-50目篩。

 

測定操作:

 


對(duì)照管

測定管

土樣(g)

0.04

0.04

甲苯(μL)

30

30

25℃靜置15min

試劑一(μL)


200

蒸餾水(μL)

200


試劑二(μL)

120

120

試劑三(μL)

80

80

30℃震蕩反應(yīng)3h,冰浴5min,12000g,4℃離心10min,取上清200μL,于微量石英比色皿/96孔板(UV)板,測定310nm處吸光值,分別記為A對(duì)照和A測定,△A=A測定- A對(duì)照

 

 

酶活計(jì)算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

酶活性定義:每克土壤每天氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-LiP活性(nmol/d /g 土樣)= ×V反總÷W÷T= 344×△A÷W

 

ε:藜蘆醛摩爾消光系數(shù):9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.4mL; W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3h

 

b.       用96孔板測定的計(jì)算公式如下

酶活性定義:每克土壤每天氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-LiP活性(nmol/d /g 土樣)= ×V反總÷W÷T= 688×△A÷W

ε:藜蘆醛摩爾消光系數(shù):9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.4mL; W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3h


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