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氣相色譜-質譜聯用(GC—MS)技術的運用
氣相色譜儀作為一項成熟的分析技術儀器可連接多種檢測器,在代謝組學中以火焰離子化檢測器(FID)和質譜檢測器zui為常見。
質譜檢測器可以通過標準譜圖庫提供化合物結構信息,并具有高靈敏度等優勢,因而非常適合于代謝組學的研究。對極性強、揮發性低、熱穩定性差的物質需要衍生化后再進行GC—Ms分析舊。衍生化不僅可以改善分析對象的揮發性、峰形、分離度,也可提高檢測的靈敏度。
Winder等"叫用氣相色譜-飛行時間質譜(GC—TOF Ms)技術對大腸桿菌提取物進行了全組分分析,建立了細胞淬滅和胞內物質提取的評價方法,證明統計分析方法和實驗結合才能實現胞內物質的定量。Ding等舊1J利用GC.TOF Ms測定工業酒精連續發酵和一次性發酵過程中酵母細胞內代謝物質的差異,分別檢測到143和128種化合物。在轉基因水稻研究中,引用GC.FID分析野生型和轉基因型水稻代謝表型的差異,用Gc-MS鑒定了在轉基因和環境影響下水稻中含量均有顯著性差異的代謝物,對轉基因水稻的安全性進行了初步的研究。
在對復雜樣品進行分析時,由于峰容量的限制,一維色譜很難達到理想的分離效果,多維色譜是改進分辨率的辦法之一。全二維氣相色譜(GC×Gc)把分離機理不同而又相互獨立的兩根色譜柱以串聯方式連接在一起,這兩根色譜柱之間裝有一個調制器(調制器起捕集再傳送的作用),經*柱分離的組分由調制器聚焦后以脈沖方式進入第二柱進行進一步的分離,所有組分從第二根色譜柱進入檢測器。GC×GC有別于中心切割的二維氣相色譜(GC+Gc)。GC+Gc是把*根色譜柱流出的部分餾分轉移到第二根色譜柱上進行進一步分離,峰容量是兩根柱的峰容量之和;而GC×GC是兩根柱的峰容量之積,因而大大提高了分離系統的分辨率。由于GC xGc在第二維上的分離非常快,一般使用FID做檢測器,與質譜聯用時僅TOF Ms能夠實現快速掃描。
GC×GC越來越多地應用于石油化工、環境保護、藥物開發、植物研究等復雜樣品的分離分析。通過實驗證明,在代謝組學研究中應用GC×GC—MS可以減少基質干擾、增大峰容量,與采用一維GC—MS相比,GC x GC-MS更適合于生物樣品的定量分析。可以預期,GC×GC技術將會在復雜混合物的分離分析尤其是代謝組學的研究中發揮更大的作用。