亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

【科捷儀器】

  由于高效液相色譜系統在醫學界的用戶越來越多，了解高效液相色譜技術和儀器裝置及工作原理很有必要。南京科捷在本文中簡述高效液相色譜技術的系統組成、工作原理、臨床應用及常見故障處理。

1   高效液相色譜法（High Perfor mance Liquid Chrom atograph Y HPLC）

    隨著醫學科學技術的發展，要求分離出入體中某種特定化合物，并給予定性分析和定量測定。色譜技術是一種常用的分離技術，它的分離原理是基于混合物中各組分在經過一個由固定相和流動相組成的體系時，由于各組分在化學性質上的差異，在兩相中具有不同的分配系數，兩相作相對運動時，被分析的混合組分隨流動相一起運動，并在兩相中進行多次的吸附和分配，使得那些分配系數只有很小差別的組分。在移動速度上產生很大差別，從而使各組分得到分離。通俗地說流動相就是帶動樣品在色譜柱里流動的物質，它相當于溶劑，固定相就是填充在柱子里的物質，它相當于吸附劑。每種固定相都具有不同的性質。

    流動相是氣體的叫氣相色譜。流動相是液體的就叫液相色譜。氣相色譜法具有快速，分離效率高。用樣量少等特點，但要求樣品能夠汽化。從而受到樣品的揮發性限制。

    高效液相色譜法（HPLC）是由現代高壓技術與傳統的液相色譜方法相結合，加上高效柱填充物和高靈敏檢測器所發展起來的新型分離分析技術。由于它只要求樣品能制成溶液，而不需要汽化，因此不受樣品揮發性的約束。對于揮發性低，熱穩定性差，分子量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為有利。如氨基酸、蛋白質、生物堿、核酸、甾體、脂類、維生素、抗生素等分子量較大。沸點較高的合成藥物以及無機鹽類。所以說HPLC具有適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復使用、流出組分容易收集等優點。

    不同種類的柱可以進行不同類型的液相色譜分離，也產生了不同的液相色譜法。如正向色譜、反向色譜、離子對色譜、離子交換色譜、凝膠色譜等。

2  高效液相色譜系統及工作原理

    高效液相色譜系統流程如圖1所示

圖1高效液相色譜系統流程圖

    由流程圖可看出系統是由儲液器，泵，進樣器，分離柱，檢測器，數據處理系統等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入進樣系統或進樣器。樣品通過進樣器以精確的體積插入流動相中。再被流動相帶到柱內，分離過程在柱內進行，被分離成單個組分的樣品依次從柱內流出，通過檢測器樣品濃度被轉變成電信號送到記錄器和數據系統，經系統處理。數據以圖譜和圖表形式打印出來。

3  高效液相色譜儀在醫院臨床中的應用

    HPLC技術主要應用是在臨床藥學和臨床學中。臨床藥學主要是治療藥物監測（TDM）和藥代動力學。HPLC之所以在TDM中占有重要地位。其主要原因是：

    （1）可以同時監測不同種類的藥物。

    （2）一次進樣可同時分析原藥及代謝產物。

    （3）分離和定量同時進行．具有較高的準確性和精確度。此外HPLC還具有*的經濟效益比，花費遠遠低于其它傳統方法。目前用HPLC分析臨床常用藥物超過數百種。已廣泛用于TDM中的如抗癲癇藥，抗心律失常藥。茶堿．撲熱息痛，環孢霉索等。在臨床研究方面，許多復雜化合物或內源代謝物也可用HPLC法分析。如血中兒茶酚胺、氨基酸、激素、前列腺素、多肽、核酸等。
此外HPLC還可應用到臨床診斷中，如在新生兒疾病篩查中，開發了血紅蛋白病的Hb，苯丙酮尿酸癥的PKU，成神經細胞瘤等方法。

    需要注意的是臨床樣品都是生物樣品，如血、尿、痰、體液等，成分復雜，性質各異，生物大分子多，必須進行適當的處理，去除某些干擾物。處理時嚴格按要求去做，否則會導致實驗失敗或造成柱的阻塞，甚至報廢。

4  高效液相色譜儀常見故障處理

    故障l  系統壓力不穩，噪音增加，色譜圖上出現毛刺。

    原因  管道中吸入空氣，溶人流動相中的空氣．泵墊圈磨損引起的泄漏，微粒污染單向閥均可引起上述癥狀。

    處理工作中注意觀察流動相的量，保證不銹鋼濾器（沉子）沉人儲液器瓶底，避免吸入空氣。流動相要充分脫氣。泵墊圈是系統中zui易磨損的部件，泵墊圈的磨損易造成高壓下的壓力不穩，并會由泵頭滲出流動相，一旦發現立即換上新墊圈，有條件的應定期更換泵墊圈。上述問題解決后泵仍不能正常工作，考慮單向閥的微粒污染問題。小心地拆下單向閥，放入10％的硝酸溶液中超聲清洗15分鐘．再反復用色譜級水清洗數遍，zui后用甲醇清洗兩次，用洗耳球由進液方向反吸氣，如不通氣說明故障已排除，裝上單向閥即可。

    故障2  柱壓高。

    原因  一是樣品沉積在柱內，二是柱內濾片阻塞。

    處理  對*種情況，可用能溶解所測樣品的溶劑沖洗，沖洗時拆開柱與檢測器之間的接頭，正向沖洗，或將柱出口接在泵上反向沖洗。注意不要讓沖洗液通過檢測器流動池，避免流動池污染。沖洗30分鐘后接上檢測器。若沖洗不見效，考慮第二種情況，更換柱頭濾片。

    故障3  出峰不佳，峰分叉（雙峰）。

    原因  柱頭填料塌陷。

    處理  擰開柱頭，取出濾片，檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷．再填，用與柱內徑相同的頂端平面光滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇。再壓緊反復幾次，直至裝滿填平。擦干凈柱外壁的填料，加上新濾片，擰緊柱頭，接上泵沖洗，用流動相沖洗30分鐘后再接檢測器。

    故障4  換柱后出現峰肩。

    原因  柱安裝位置不佳。

    處理  松開柱，輕輕轉動一角度，重新安裝上緊，*甲醇沖洗30分鐘即可。

    故障5  峰面積改變。

    原因  加樣針不到位。

    處理檢查加樣針是否插到底．保證針到位。實際工作中碰到的問題很多，日常保養很重要。如儲液器的清潔，流動相的脫氣，每天用后系統中的緩沖液要沖洗干凈。先用蒸餾水沖洗15分鐘，然后用甲醇沖洗，防止無機鹽沉積造成系統內的磨損和阻塞，這些都可以減少故障的發生。另外對HPLC技術及設備原理的了解也非常重要，這樣就能夠提高儀器的利用率，更好地發揮儀器作用。