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競爭法ELISA的原理是什么?

閱讀:3026      發布時間:2023-11-13
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你知道競爭法ELISA的原理是什么嗎?讓我們一起來看看吧!

競爭法ELISA(也稱抑制或封閉法ELISA)通過定量某種樣品分析物對預計信號的干擾,來測定該分析物在樣品中的含量,可通過以下方式進行:微孔板用一種分析物或一種對靶標分析物具有特異性的抗體包被(即直接法和間接法),再添加一種有部分某種檢測的靶標分析物,以競爭結合抗體上的位點。信號與分析物含量呈負相關,因此,如果靶標分析物的濃度較分析物高,靶標分析物競爭性結合有xian量的標記抗體,參考信號將會較靶標分析物的濃度較低的情況增強。

競爭法的理論基礎是xian量抗體,只有在xian量抗體基礎上,兩種抗原才會形成競爭關系。該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質。

競爭法ELISA是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:

1. 將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

2. 加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

3. 加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結,由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限,因此當檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結,即所謂競爭法之由來。

4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素底物使酵素呈色,當檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。

5. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA

當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA

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