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農桿菌感受態細胞提高轉化效率的6大關鍵點

閱讀:670      發布時間:2025-3-24
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一、農桿菌感受態細胞

感受態細胞指通過物理或化學處理使細菌處于易于吸收外源DNA的狀態。農桿菌感受態細胞的制備是植物轉基因實驗的關鍵步驟,直接影響Ti質粒的轉化效率。目前主流方法為CaCl?化學法,具有成本低、操作簡便的優勢。

二、農桿菌感受態細胞的制備

三、提高轉化效率的6大關鍵點

菌體生長階段:嚴格監控OD值,避免進入穩定期

低溫操作:所有試劑、離心管預冷至4℃,操作全程冰浴

離心速度:超過6000g可能導致細胞破裂

無菌環境:避免雜菌污染導致轉化失敗

甘油濃度:保存液甘油濃度控制在15%-20%

凍存方式:液氮速凍可減少冰晶損傷

四、常見問題與解決方案

問題現象

可能原因

解決方法

轉化效率低

菌體過度生長

控制OD???≤0.6時收集菌體

背景菌落多

抗生素失效

新鮮配制選擇培養基

無轉化子

質粒濃度不足

使用≥100ng/μL的高純度質粒

五、技術延伸:電轉法VS化學法

CaCl?法:適合常規實驗,轉化效率約10? CFU/μg DNA

電轉化法:效率可達10?-10? CFU/μg,但需專用電轉儀
推薦優先掌握化學法,待技術成熟后升級電轉方案

六、應用領域與發展趨勢

制備的高質量感受態細胞可用于:

1. 植物遺傳轉化(煙草、擬南芥等模式植物)

2.   CRISPR/Cas9基因編輯載體遞送

3. 合成生物學元件功能驗證
4. 最新研究顯示,添加0.01%聚乙二醇(PEG6000)可使轉化效率提升30%

 

總結:掌握農桿菌感受態細胞制備技術,是開展植物基因功能研究的基礎技能。通過本文的標準化操作指南與優化策略,可顯著提高實驗重復性與轉化成功率。建議定期進行 competency test,結合具體實驗需求調整制備參數。

天津益源利康生物科技有限公司可提供各種細胞、抗體、蛋白、試劑盒、耗材等,歡迎咨詢。

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