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在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

ELISA試劑盒檢測過程中的注意事項

一、ELISA實驗通用規則

1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但最好有專業人員進行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。

3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。

4、實驗時，要使底物避光保存。

5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。

6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

12、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

13、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

15、待檢樣品要澄清，否則會影響結果。

16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。

17、應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。

18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。