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關于細胞轉染，有許多常用的轉染試劑。下面簡單介紹下Lipo3000轉染細胞的步驟及注意事項。

實驗準備：Lipofectamine™ 3000轉染試劑、Opti-MEM（可以用無血清的培養基代替）

實驗步驟：

1.接種細胞，使其在轉染時達到70–90%匯合度。

注：對于HEK293，6孔板一般鋪50萬個細胞左右。對于PC9, 24孔板一般鋪5-10萬個細胞。由于不同細胞，生長狀況不太一樣，需要根據情況調整。

2.使用Opti-MEM™培養基稀釋Lipofectamine™ 3000試劑，充分混勻。

3.使用Opti-MEM™培養基稀釋DNA，制備DNA預混液，然后添加P3000™試劑，充分混勻。

4.將上面兩步溶液合在一起，混勻并孵育10-15mins。

5.將混勻后的溶液加入到細胞培養基中，并輕輕搖晃培養基，使其均勻。

6.37°C孵育細胞2–4天，然后分析轉染細胞。

注意事項：

1.Opti-MEM需要37℃水浴鍋預熱。

2.轉染siRNA至細胞時，在稀釋siRNA時不要加入P3000™試劑。

3.關于Lipo3000的用量，比如6孔板推薦用量有兩個3.75ul和7.5ul，最di看轉染效率，zui高看細胞耐受。

4. Opti-MEM與Lipo3000預混及Opti-MEM、質粒及P3000預混，都不需要各自孵育，而且兩者混合后孵育時間最多不要超過15mins。

5.轉染中和轉染后的細胞培養基中最好不要含有雙抗。

對于比較好轉染的細胞，如HEK293，而且需要大量轉染的時候，可以使用PEI進行轉染，畢竟Lipo3000比較貴。例如，在做CO-IP實驗時，需要10cm皿轉染好幾種質粒，就可以用PEI進行細胞轉染。