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ATCC細胞轉化試驗的原理與操作指南

閱讀:655      發布時間:2024-9-11
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  ATCC細胞轉化試驗是一種重要的生物學實驗方法,用于評估細胞在特定刺激下的增殖活化反應。其原理和操作指南如下:
  原理
  ATCC細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA等)的刺激后,會表現出明顯的增殖活化反應。這一過程具體表現為細胞體積增大、代謝旺盛以及蛋白和核酸合成增加,即向母細胞轉化。細胞轉化率的高低能夠反映機體的細胞水平,因此,ATCC細胞轉化試驗常被用作測定機體功能的重要指標之一。
  操作指南
  準備階段:
  準備好細胞培養皿或細胞培養瓶,以及產品說明推薦的相應細胞培養基。
  在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基,以確保細胞在復蘇后能夠迅速適應環境。
  細胞復蘇:
  小心取出裝有ATCC細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微攪拌以幫助解凍。注意解凍時間不宜過長,以避免冰晶對細胞的損傷。
  解凍后,在細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布試干,并在生物安全柜中嚴格操作。
  細胞培養:
  將復蘇后的細胞轉移到含有適當培養基的容器中,并在無菌條件下進行培養。
  培養條件應設置為溫度37℃、二氧化碳濃度5%的細胞培養箱中,以確保細胞能夠正常生長和增殖。
  刺激與觀察:
  在細胞培養至一定階段后,加入非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)進行刺激。
  觀察細胞在刺激后的變化,包括細胞形態、生長速度、代謝活性等。
  結果分析:
  根據細胞轉化率的高低來評估機體的細胞水平或機體功能。
  常用的分析方法包括形態計數法、MTT法(四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法)和同位素法等。其中,MTT法通過測定細胞培養物的OD值來計算反應體系中細胞的增殖程度。
  請注意,以上操作指南僅供參考,具體實驗步驟可能因實驗條件、細胞類型等因素而有所不同。在實際操作中,應嚴格遵循實驗室的安全規范和操作規程,確保實驗的準確性和可靠性。

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