亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

【實驗方法與步驟】

（1）細胞凋亡的誘導：HeLa細胞常規傳代培養至對數生長期(見細胞傳代培養）。實驗組細胞加入順鉑溶液（生理鹽水配置）至終濃度為20μmo1/L,二氧化碳培養箱設定37℃，5% CO2條件下繼續培養。空白實驗對照加入等體積的生理鹽水，同樣條件繼續培養。24h后進行染色及形態學觀察。      

（2）胰酶消化細胞，將培養基上清及消化下來的細胞一同轉入離心管中600~800r/min離心10min。     

（3）吸去上清，用1mL PBS重懸細胞沉淀，并轉入1.5mL微量離心管中，600~800r/min離心10min。    

（4）吸去上清，用500μL PBS重量細胞沉淀，取178μL轉入0.5mL的微量離心管中，加入PI 20μL（終濃度100μg/mL），Hoechest 33342 2μL（終濃度10μg/mL），混勻，37℃溫箱中避光標記15min。     

（5）600~800r/min離心10min，棄上清，加50μL PBS重懸細胞。    

（6）分別從實驗組及對照組中取10μL細胞懸液滴于載玻片上，蓋上蓋玻片。     

（7）熒光顯微鏡20倍物鏡在紫外光激發下觀察，可觀察到凋亡細胞核形態發生明顯的改變，出現染色質凝集及邊緣化。

【注意事項】       

（1）誘導細胞凋亡后收集細胞時，注意要同時收集細胞培養基上清液。   

（2）懸浮細胞時動作要輕柔，避免損傷細胞。     

（3）在實驗中可同時設計壞死細胞的對照，例如，取正常細胞經低滲后進行染色觀察。