亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>技術參數>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

免疫放射分析技術:核素標記的抗體檢測抗原

來源:武漢貝茵萊生物科技有限公司   2010年12月03日 11:36  

1968年Miles和Hales建立了利用核素標記的抗體檢測抗原的放射分析法,為了與放射免疫分析區別,故稱免疫放射分析技術(immunoradiometric assay,IRMA)。由于它應用核素標記抗體作為示蹤劑,在反應體系中加入過量的抗體,待測抗原(或標準品)與和核素標記抗體進行全量反應,故亦稱非競爭性免疫分析法。IRMA與RIA相比較有以下特點:

1、IRMA反應系統中應用的標記物為免疫球蛋白。易于提純和進行碘化標記,標記抗體的比活度較高,有利于提高分析的靈敏度,且不同抗體的標記方法基本相同;而在RIA中應用的標記物是抗原。抗原種類繁多,化學結構各異,較難獲得純品,標記方法亦多種多樣。

2、在IRMA反應系統中使用過量的標記抗體,直接與抗原結合,不存在競爭結合的復雜反應,因此反應速度較快,即使使用親和力較低的單可隆抗體,也能滿足實驗要求;而在RIA中抗體是微量的,所以一定要用高親和力的多可隆抗體

3、IRMA使用的標記抗體和固相抗原在反應中都是過量的,只有待測樣品加樣誤差才會影響分析結果,因此IRMA的批內和批間變異(CV%)比較小;而RIA使用的抗體和標記抗原在反應中是固定量的,加樣誤差可嚴重影響測定結果。

一、基本原理

將核素標記在抗體上,然后以過量的標記抗體與待測抗原結合,未結合的標記抗體通過和固相的抗原免疫吸附劑結合而去除,溶液中的放射性與待測抗原的含量呈正相關。根據檢測過程的操作步驟不同,有以下幾種類型

1、直接IRMA法

將待測抗原與過量的標記抗體進行溫育,使二者結合,然后加入固相抗原免疫吸附劑再次溫育,吸附游離的標記抗體。離心去除沉淀物,測定上清液中放射性強度,根據標準曲線即可得知待測樣品中抗原的含量。

2、雙抗體夾心IRMA法

在待測抗原內依次加入固相抗體和標記抗體,反應后形成固相抗體(Ab1)-抗原-標記抗體(Ab2)復合物,洗滌去除游離的標記抗體,測定固相抗體或載體上免疫復合物的放射性強度,根據標準曲線即可得知待測樣品中抗原的含量。此法僅用于檢測有多個決定簇的多肽和蛋白質抗原。

3、間接IRMA法

此法是在上述雙抗體夾心法的基礎上,進一步改良為用核素標記抗Ab2的抗體(羊抗兔或抗鼠的IgG),反應后形成固相抗體(Ab1)-抗原-Ab2-*Ab3(標記抗抗體)的四重免疫復合物。其中,Ab3可作為通用試劑,可省去標記針對不同抗原的特異性抗體。

4、BSA-IRMA法

是將生物素-親合素系統(BSA)引入免疫放射分析,建立的新一代IRMA。此法zui大的優點是使用生物素化抗體和以核素標記親合素為示蹤劑,可以通用于甾體類、前列腺素等小分子物質的檢測。由于1個抗體分子上可標記數十個生物素分子,而每個親合素又可與4個生物素分子結合,從而產生多級放大效應。同時生物素與親合素之間的親和力要比抗原抗體間的親和力大10萬-100萬倍,二者結合極為穩定,因此,使其靈敏度、特異性和精密度都大大提高。目前一些超靈敏度的IRMA分析試劑盒就是應用上述原理制成的。

二、基本試劑及材料

1、標記抗體

2、固定抗原吸附劑

3、標準抗原

4、待測樣本

5、γ計數儀和低溫離心機

三、操作方法

以固相雙抗體法測定血清中促甲狀腺素(TSH)為實例

1、按下表逐一加樣(加樣量為ml,均設雙復管)

 

混勻,37℃溫育120min

棄上清(T*除外,以下同),加2ml洗滌液,放置2min

棄上清,再加2ml洗滌液,放置2min

棄上清,將各管倒置在吸水紙上

2、用γ計數儀分別測量各管放射性強度,以兩管cpm的均值表示,分別計算結合率(B%,即B/T* ´100%)

3、用B%為縱坐標,不同濃度的TSH標準品為橫坐標繪制標準曲線,然后根據檢測管的B%,從標準曲線中即可查得相應的TSH含量

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 赤城县| 济阳县| 昌吉市| 万盛区| 汾西县| 江孜县| 思南县| 松桃| 响水县| 大庆市| 手游| 新晃| 通河县| 静安区| 罗江县| 陈巴尔虎旗| 克什克腾旗| 衢州市| 永定县| 新田县| 海伦市| 呼和浩特市| 察隅县| 保靖县| 岳西县| 岚皋县| 宁南县| 吴旗县| 吉木萨尔县| 大悟县| 柳州市| 米易县| 稻城县| 会宁县| 大埔县| 富锦市| 扎鲁特旗| 祁连县| 托克托县| 广饶县| 黄陵县|