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3種嘌呤堿HPLC法測定

來源:深圳市億鑫儀器設備有限公司   2017年03月28日 06:58  

4種動物藥水提液中3種嘌呤堿HPLC法測定

對烏蛇、蟾蜍、土蟲和地龍干燥粉末進行超聲提取、離心分離、濾膜過濾后直接注入液相色譜儀中測定,紫外檢測黃嘌呤、次黃嘌呤、腺嘌呤含量。

  • 主要儀器和試劑

   等度液相色譜儀,配紫外檢測器

   超聲波清洗機            離心機:10 000 r /min

   無油真空泵              溶劑過濾器

   柱溫箱                  甲醇:色譜純

   標準品:次黃嘌呤( hypoxanthine) 、黃嘌呤( xanthine) 、腺嘌呤( adenine)

   實驗室用水為超純水

  • 色譜條件

   色譜柱:C18色譜柱,250 mm ×4.6 mm, 5μm

流動相:甲醇:水=5:95(V:V)

流速:1.0 mL /min

柱溫:30

檢測波長:254 nm

進樣量:20μL

  • 標準試樣配置

   將標準品配制成濃度為015 g/L標準儲備液,逐級稀釋,配制成濃度為510 ×10- 9110 ×10- 8210 ×10- 8510 ×10- 8110 ×10- 7210 ×10- 7510 ×10- 7810 ×10- 7 g/mL的標準系列,0.45μm濾膜過濾后,直接注入色譜儀測

其峰高,以質量濃度c ( g/mL)對峰高y進行線性回歸,得次黃嘌呤、黃嘌呤、腺嘌呤線性方程分別為: y =81935 8x - 11219 7 ( r =01999 7) ; y =31242 6x +01562 5 ( r =01999 9) ; y =31951 6x - 01516 9 ( r =01999 6)

  • 試樣配置

     分別將烏蛇、蟾蜍、土蟲、地龍樣品粉碎、混勻、過孔徑為180μm,準確稱取樣品置于試劑瓶中,加入純凈水8 mL,蓋緊瓶塞,超聲提取一定時間,將提取液轉入離心管中,10 000 r /min離心10 min,清液轉入10 mL容量瓶中定容、搖勻。經0.45μm濾膜過濾后直接注入色譜儀測定。以保留時間定性,外標峰高法定量。

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