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25格×16格的血球計數板使用方法介紹

來源:上海子實生物科技有限公司   2017年06月26日 12:05  

血球計數板介紹用厚玻璃制成。每塊計數板由H形凹槽分為2個同樣的計數池。計數池兩側各有一支持柱,將特制的蓋玻片覆蓋其上,形成高0.10mm的計數池。計數池畫有長、寬各3.0mm的方格,分為9個大方格,每個大格面積為1.0mm。容積為0.1mm(ul),其中,中央大方格用雙線分成25個中方格,位于正中及四角5個中方格是紅細胞計數區域,用單線劃分為16個小方格。

四角的4個大方格是白細胞計數區域,用單線劃分為16個中方格。根椐標準局(NBS)規定,大方格每邊長度允許誤差為±1%。 

使用方法:

1.視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數可數為度。 

2.取潔凈的血球計數板一塊,在計數區上蓋上一塊蓋玻片。 

3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區,勿使氣泡產生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上(不要使計數區兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數區深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。 

4.靜置片刻,使細胞沉降到計數板上,不再隨液體漂移。將血球計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩,先在低倍鏡下找到計數區后,再轉換高倍鏡觀察并計數。由于細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度。 

5.25個大方格組成的計數區,除數上述四個大方格外,還需數中央1個大方格的菌數(即80個小格)。為了保證計數的準確性,避免重復計數和漏記,在計數時,對沉降在格線上的細胞的統計應有統一的規定。如菌體位于大方格的雙線上,計數時則數上線不數下線,數左線不數右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格,本格的下線和右線上的細胞按規定計入相應的格中。

6.對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數量。 

7.測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,放入盒內保存。 

計數公式:

25格×16格的血球計數板計算公式:

細胞數/ml=80小格內細胞個數/80×400×10000×稀釋倍數

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