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INS-1 cell 的細胞培養

來源:上海子實生物科技有限公司   2017年06月26日 12:10  

INS-1細胞還是比較好長的,培養條件是RPMI1640+0.11g/L L-Glutamine +0.11g/L 丙酮酸鈉+5.6 MMOL/L 葡萄糖+ 50umol/L 2 –mercaptoethanol + 10%FBS ,細胞本身就是成片生長的,細胞對胰酶比較敏感,如果消化不好,細胞狀態會受到很大的影響,甚至會不貼壁死亡,我一般用0.05%胰酶-EDTA消化半分鐘就好了

1000mmol=1mol=質量/分子量,你計算好需要的總體積然后根據濃度換算出需要的質量,即克數!
細胞培養階段是用普通1640,也就是含糖11.1mmol/L的培養基,給不同糖濃度刺激時,換用無糖1640配置需要的糖濃度

INS-1細胞的培養條件是:Cell culturing: INS-1 cells were cultured to near confluence in RPMI-1640 medium with 11 mmol/l D-glucose supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 100 U/ml penicillin, 100 ug/ml streptomycin, 10 mmol/l HEPES, 2 mmol/l L-glutamine, 1 mmol/l sodium pyruvate, and 50 umol/l b-mercaptoethanol. 可見對葡萄糖濃度的要求是常規RPMI-1640的GLU濃度,值得一提的是該細胞對2-ME(b-mercaptoethanol)巰基乙醇確實依賴的,如果不添加,細胞難以生長。

INS-1細胞是不難培養的,只是培養基成份多了一些,各位在配培養基的時候要多加小心。
一、細胞株說明
1. 細胞名稱:大鼠胰島素瘤細胞
2. 生長特性:貼壁生長
3. 培養條件:RPMI1640+0.11g/L L-Glutamine +0.11g/L 丙酮酸鈉+5.6 MMOL/L 葡
萄糖+ 50umol/L 2 –mercaptoethanol + 10%FBS
4. 傳代比例:1:3-1:6
5. 培養環境:37℃,5%CO2,95%O2

賣胰島素細胞的ATCC

通過ATCC現能買到的胰島細胞株有6種,你上面所提的INS-1就有。我就介紹一下該株的一些特性:
Asfari建立了INS-1、INS-2胰島細胞系,其母系是RINm5f(來自于放射線誘導的胰島素瘤)。RIN細胞與淋巴細胞共培養于含β-疏基乙醇的培養基,Asfari發現一些漂浮的細胞聚集成團,形態與RIN相異,分離及純化這些細胞即得到INS,這些細胞的活力必須依賴于β-疏基乙醇的存在,其zui大的特點是其激素分泌與體內的胰島細胞相似,具有葡萄糖刺激的胰島素分泌。

一般而言,細胞株胰島素分泌功能越強,轉染效率越差,越容易受損、死亡;相反,若細胞株分化差,分泌胰島素功能很差,轉染效率可能越高,越不容易死亡。另外,若用脂質體轉染時,濃度要低,否則可能死很多細胞;雖然效率可能低些,但是存活率高。

Hans E. Hohmeier , Christopher B. Newgard et al. Cell lines derived from pancreatic islets.Molecular and Cellular Endocrinology 2004,121–1.

葡萄糖刺激的胰島素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)功能
另外,一位經驗豐富的老師(diabetes等雜志發表過文章)提出忠告: 具有GSIS功能的胰島細胞不容易穩定轉染(非常困難) ,瞬時轉染會容易些。

我養過三種胰島B細胞系分別是RIN5F,INS-1,MIN6,前兩者是大鼠胰島B細胞系,MIN6是小鼠的, 其中養的是RIN5F,該細胞系一般用來做信號傳導方面的研究. INS-1要復雜一些,據我所知,INS-1的GSIS功能不好,一般不能用來做功能試驗,但是在另有一個INS-1E細胞系,具有一定的GSIS功能,高糖時insulin分泌量/低糖約為3-5倍, MIN6是其中GSIS功能的,但也是zui難養的,用它做實驗是一種折磨,我是用原代的胰島細胞來做GSIS功能試驗的.
另外,在進行質粒轉染時,胰島素分泌功能越好的細胞轉染愈難.用脂質體法是不可能轉染上原代胰島細胞的.

我知道華中科技大生物物理和化學研究所一是用元代細胞作轉染;另外他們有ins-1胰島β細胞株進行腺病毒轉染,他們實驗室的老板是徐濤教授;方法相對成熟。

HIT-15是錯誤寫法, 應是HIT-T15, 中間多一個T, 另外該細胞系的GSIS的zui高倍數是2倍,這種細胞用于功能研究欠考慮.也不是*的功能檢測β細胞系
目前大多用于機制及信號傳導研究

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