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抗原elisa試劑盒日常使用故障及處理方法

來源:上海谷研生物實驗室   2017年08月10日 15:00  

抗原elisa試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。ELISA試劑盒包含以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標記的抗原或抗體(結合物);酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考尺度品和控制血清(定量測定中);酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;洗滌液;酶反應終止液。ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。在ELISA試劑盒使用過程中經常會遇到一些故障影響正常工作,那么,具體該如何處理呢?
一、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 
3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。 
2) 加樣后及時放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標本較多時,請分批操作。
三、孵育
可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*; 
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
四、抗原elisa試劑盒洗板
可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
抗原elisa試劑盒

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