產品名稱：4T1-GFP小鼠乳腺癌細胞-綠色標記 處理方法

規格4代復蘇細胞，常溫運輸。25t培養瓶灌滿培養基。售后周期一周。

1代凍存細胞，干冰運輸。兩支凍存管（買一送一），售后周期1個月。

4T1-GFP熒光標記細胞株規格運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）4T1-GFP熒光標記細胞株規格復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。凍存培養基

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。

1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
4T1-GFP小鼠乳腺癌細胞-綠色標記操作步驟：
請收到細胞后，在倒置鏡下(建議在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
（二） (二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1.棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。
如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。