Bel-7402-LUC人肝癌細胞-熒光素酶標記 處理步驟-ATCC保藏中心
【Organism物種來源】Animal 
【Tissue組織來源】 
【Cell Type細胞類型】 
【Product Format產品狀態】 frozen/live culture
【Morphology細胞形態】 
【Culture Properties細胞特性】 
【Biosafety Level生物安全級別】 1/2
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.

【Disease細胞源疾病】
【Age年齡】 
【Gender性別】 Male/Female
【Storage Conditions保存條件】 liquid nitrogen vapor phase
【Karyotype染色體組型】 
【Images細胞圖片】 Cell Micrograph
【Derivation衍生細胞】
【Clinical Data臨床數據】 
【Comments其他描述】 
【Complete Growth Medium*培養基】 The base medium for this cell line is DMEM/RPMI-1640 Medium. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%. 
【Subculturing傳代方法】 
Volumes are given for a 75 cm2 flask. Increase or decrease the amount of dissociation medium needed proportionally for culture vessels of other sizes.
Remove and discard culture medium.
Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
Incubate cultures at 37°C.
Subc*tion Ratio: A subc*tion ratio of 1:2 to 1:6 is recommended
Medium Renewal: 2 to 3 times per week
【Cryopreservation凍存條件】 
【Freeze Medium凍存培養基】Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSO
【Storage Temperature保存溫度】 Liquid nitrogen vapor phase
【Culture Conditions培養條件】 
【Atmosphere培養環境】 Air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
【Temperature培養溫度】 37°C
【STR Profile圖譜】 
【Population Doubling Time倍增殖時間】
【References參考文獻】

Bel-7402-LUC人肝癌細胞-熒光素酶標記操作步驟：
請收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
（二） (二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1.棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。
如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否 則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們。
 

蟾毒靈對人肝癌多藥耐藥BEL-7402/5-FU細胞增殖活性的影響
目的 研究蟾毒靈對人肝癌多藥耐藥BEL-7402/5-FU細胞增殖活性的影響.方法 用噻唑藍比色法觀察蟾毒靈及5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿霉素、長春新堿對BEL-7402親本及耐藥細胞的抑制作用;流式細胞術檢測1.00、0.10、0.01 μmol/L蟾毒靈作用24 h 對細胞凋亡率及細胞周期的影響.結果 BEL-7402/5-FU細胞對上述化療藥物均有不同程度的耐藥性.蟾毒靈對BEL-7402親本及耐藥細胞24、48 h 的半數抑制濃度無統計學差異(P＞0.05),可明顯抑制BEL-7402/5-FU細胞生長.不同濃度蟾毒靈作用24 h 后的細胞凋亡率及IC50比較均有統計學差異(P均＜0.01),且細胞G0/G1期降低,G2/M期升高,呈劑量依賴性(P＜0.01).結論 蟾毒靈對人肝癌多藥耐藥BEL-7402/5-FU細胞無交叉耐藥性,有增殖抑制作用,且呈時間、濃度依賴,其作用可能通過阻滯細胞周期進程和誘導細胞凋亡實現的.

購買上海琛藝細胞注意事項發布
一、客戶收到細胞先不開蓋，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議受收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；
收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。
二、如為貼壁細胞，請在顯微鏡下觀察細胞密度：
1.  未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作；然后打開蓋子，先用槍頭把培養基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過火（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養16hr(時間根據細胞生長情況調整）之后，傳代或者凍存。
2. 超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。具體步驟如下：
1) 棄去培養液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；
2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA）于T25培養瓶中，倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又將培養瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養培養瓶，細胞隨即脫落下來；
3) 加入6-8ml*培養基，吸出，分到新的培養瓶中，按要求分瓶。
三、如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
注意：換液時一半用我們的培養基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。
四、細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？
（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發；
（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發；
（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數細胞未存活，重發；
（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現污染，重發；
（5）視具體情況而定。
五、細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
（3）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
（4）細胞培養時經其它處理的，不重發；
（5）細胞收到2天內，未告知，不重發；
（6）視具體情況而定。

更多標記細胞如下：