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BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細胞-熒光素酶標記 處理方法

來源:上海琛藝實業有限公司   2020年01月14日 08:58  

BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細胞【已通過STR鑒定】

細胞英文(簡稱):BXPC-3(BXPC3)

細胞名稱:BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細胞-熒光素酶標記 處理方法

背景資料

該細胞株不表達囊腫性纖維化跨膜電導調節子(CFTR)。 

細胞來源:ATCC CRL-1687

代次:P3

規格:T25

細胞數:1x10^6 cells

組織來源:胰腺;腺癌

BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細胞【已通過STR鑒定】 形態:貼壁;上皮細胞樣

細胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

培養條件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2

傳代方法:*建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件:90%FBS+10%DMSO

動物細胞培養,大致的步驟是這樣:

1.從動物胚胎或者一些剛出生的動物的器官或者組織上取得細胞,配制成細胞懸浮液.把細胞液放到培養瓶中,在培養箱里培養--------原代培養.

但是,不要以為這樣就能一直無限培養下去.

因為BXPC-3(BXPC3)人胰腺腺癌細胞【已通過STR鑒定】 在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止分裂增殖,出現一種接觸抑制.

2.我們為了它們能繼續增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細胞懸浮液,分開裝到好幾個瓶子里繼續培養--------傳代培養.

1. BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細胞-熒光素酶標記 處理方法慢病毒感染&篩選

1.感染前一天(Day1),消化4T1細胞并計數,將細胞鋪于24孔板中(以便在感染前細胞達到30%-50%的匯合度,37°C過夜孵化細胞。

2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液,并且制備1:2病毒稀釋液200µl加入細胞中。

3.向每孔加入Polybrene達到終濃度6ug/ml,晃勻孔板,37度孵化過夜。

4.(Day3)移去含有慢病毒的培養基,加入500µl*培養基。

5.(Day4)換液,加入300µg/ml  Hygromycin(Sigma)來選擇穩定感染的細胞克隆。

6.(Day4-7),每24h換液,300µg/ml Hygromycin(Sigma)來選擇穩定感染的細胞克隆。

維持培養。

7.(Day8-12)細胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中100µg/ml Hygromycin維持培養。

8. 4T1-Gluc/Mluc細胞系鑒定: 取5×104細胞,用Passive Lysis裂解液裂解,加入熒光素酶作用底物,將轉染質粒的細胞與陰性,陽性對照共同進行單報告基因檢測。GFP和mCherry表達通過熒光顯微鏡觀察。

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