Bio-rad微滴式數字PCR（DDPCR）技術 

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革命性的微滴式數字

 PCR技術,使實體瘤腫瘤負荷的血清學定量分析成為可能   

Revolutionary Droplet Digital PCR,Enable Absolute Quantification of Serum Tumor Burden   技術原理   

微滴式數字PCR系統在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應體系分成數萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后，對每個微滴的熒光信號進行逐一分析，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。   

技術優勢   

通過把樣本稀釋成許多部分，然后在一個反應發生的時候對其進行計數。其靈敏度高達0.001%，顯著高于擴增阻滯突變系統（0.1%）和Sanger法測序（10%）。同時能克服核酸降解的不利影響，非常適合一些稀有樣本中核酸的精確檢測。   

高靈敏度、高特異性檢測復雜背景下的靶標序列   

靈敏度可達0.001%，樣本珍貴或者樣本核酸存在降解時的*選擇。在穿刺樣本、胸腹水、外周血中即可完成靶標序列的檢測。   

所需樣本量少   

200ul血漿或1ml全血/  2-3片白片/  納克級活檢組織。   

實驗數據分析便捷   

每個微滴的檢測結果以陰性、陽性判讀，數據分析自動化。   

可統計突變率   

真正意義上的定量，通過統計分析可得出靶點的突變率。   

臨床應用   

腫瘤早期篩查   

微滴式數字PCR技術作為迄今為止zui靈敏的檢測腫瘤細胞突變DNA的手段，可有效應用于腫瘤的早期篩查。微滴式數字PCR技術可以通過檢測患者外周血樣對進入外周血循環的腫瘤組織核酸進行分析，相對于傳統的PCR檢測方法，有更高的靈敏度，可以更好的勝任稀有變異檢測的工作，實驗數據證實微滴式數字PCR可以實現0.001%的突變頻率篩查。   

腫瘤病理學輔助診斷   

微滴式數字PCR的一個主要優勢是所需樣本量很低，這對于臨床來說特別有意義，尤其是當病理樣本太少時，DDPCR可以幫助檢測突變，來輔助診斷對藥物的敏感性。另外在腫瘤均質細胞內檢測單一突變相對簡單，但是如果在異質細胞內，在僅存有少量攜帶突變腫瘤細胞的情況下，突變的特定等位基因是否可以被準確檢測到，直接影響到靶向治療是否有效。微滴式數字PCR 在進行突變/稀有變異檢測中發揮著重要的作用，是臨床腫瘤樣本靶向藥物分子檢測的*。   

圖1.在外周血中檢測肺癌患者不同濃度樣本的EGFR第21號外顯子的突變率   

腫瘤負荷的實時監控   

微滴式數字PCR技術由于可以檢測外周血循環細胞中微量腫瘤細胞突變DNA，成為進行腫瘤負荷實時監控的有效手段，判斷患者體內腫瘤細胞負荷更加科學、可靠、及時。   

 圖2.通過在外周血中檢測肺癌患者KRAS基因某一位點的突變率，來實時監測患者體內腫瘤細胞負荷   

藥物耐藥突變外周血監控   

目前，許多腫瘤常規化療效果差，預后不良是困擾臨床的重要難題，而腫瘤多藥耐藥性則是腫瘤化療失敗的關鍵因素。經治療后，殘存的腫瘤干細胞耐藥性形成，常導致對某些藥物治療敏感性降低，并引起腫瘤復發甚至轉移，因此，對藥物耐藥突變的篩選和監控成為當今醫學界研究的熱點。