CCK8全稱Cell Counting Kit-8,是一種基于WST-8(化學名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類似于MTT,在電子耦合試劑存在的情況下,WST-8可以被線粒體內的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的數量有關。CCK8法在藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性實驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面應用廣泛。
注意事項:
1、接種細胞應選對數生長期細胞進行,同時需要選擇合適的細胞濃度。
2、檢測的時,試劑加入的時候沿著孔壁加入,不要產生氣泡,否則會干擾讀數。
3、檢測OD值范圍在0.1-2之間,較為理想的OD值范圍為1-2。
4、酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
5、為了個人安全,建議穿戴實驗服和一次性實驗手套操作。
心得體會:
1、同MTT實驗一樣,96孔板的邊緣效應,邊孔的水分蒸發很快,培養液及里面的藥物會出現濃縮現象,這樣會導致數據的誤差較大,因此在實驗設置的時候,一般將邊孔留出為空白孔,在孔中加入液體,以使中間孔的水分飽和。
2、懸浮細胞由于染色困難,一般需要增加細胞數量和延長CCK8孵育時間。
3、CCK8試劑保存時間,0-5℃下保存6個月,-20℃下避光保存1年。
4、金屬對實驗結果有影響,實驗中應想法將其去除。
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