第一就是要稀釋。我們要留血漿（肝素鈉抗凝的采血管采的血，5～6ml），所以分離、取出血漿后加入和紅細胞等體積的生理鹽水，一般3ml左右，混勻。

第二，分離液不在乎體積有多少，主要是高度，如果離心管很粗的話（呵呵，挺吃虧的），就要多加一些，細一點的離心管就可以少加一些，一般高度要超過3cm。

第三，看你要分離的血是什么來源的，成人外周血比較好分，臍血和胎盤血不好分。當然，發生溶血和凝血的話就更難分了。

第四，血的保存很重要，采血后不要放到4度冰箱（當然更不能凍啦），常溫，避光即可。從采血到分離不要超過12個小時，不然效果也不好。

第五，就是離心的速度和時間。不同的離心機，肯定轉速不一樣的，我們實驗室一般用水平離心機2500轉，20分鐘，基本上沒有紅細胞了，淋巴細胞也很多。這一條要自己多試試。

第六，淋巴細胞分離液的保存不必放在4度，常溫即可，無論是否開封了的。我們試過，分離液一放到4度后，無論復溫的效果如何，分離的效果都沒以前好。

1.用0.85%生理鹽水對倍稀釋抗凝血液標本。

2.取淋巴細胞分離液3-4ml于干凈試管中。

3.往淋巴細胞分離液上層緩緩加入2倍于分離液體積的稀釋外周血量。

4.2000-2500RPM轉速離心15分鐘。

5.用吸管吸取中層白色渾濁液于eppendorf管-20℃保存待用。

注意事項：

1、取血的質量很重要，分離界面清楚的總是血樣質量好的（實驗室人自己獻的），我們用Hanks對倍稀釋!分離液一般是稀釋血量的1/2！

2、離心時間很有關系各實驗室離心機不同，自己摸索一下就好了！

3、破碎紅細胞我們用雙蒸水少于一分鐘。

4、試管的干凈程度也有關系的。