轉染細胞的方法有很多,這里介紹一種比較經濟實用的轉染試劑--聚乙烯亞胺(即PEI)。PEI(polyethylenimine)是一種帶有高電荷陽離子的多聚物,非常容易結合帶負電荷的DNA分子,形成復合物,并轉染到貼壁和懸浮細胞中,常用于大規模瞬時轉染表達。在HEK293和CHO等細胞中轉染效率較高。那么如何利用PEI轉染細胞呢?
實驗前準備:
PEI (polysciences, Cat#:24765-1),將PEI配置成1ug/ml,用0.2μm濾膜過濾,并分裝儲存于負80度。
實驗步驟(以轉染293T為例):
1.在六孔板中鋪10萬個細胞,在二氧化碳培養箱中孵育過夜。
2.在100ul DMEM中加入2ug目的質粒。如果是10cm皿可以加入5ug質粒。
3.加入10ul PEI,立即混勻。室溫孵育10min。
4.然后再補加600ul DMEM培養基。
5.吸掉六孔板中的培養基,然后將700ul混合液慢慢加入到細胞中,輕輕搖晃混勻。
6.在二氧化碳培養箱中孵育3小時,然后加入2ml wan全培養基(DMEM+10%FBS)。
7.培養箱中孵育48小時,進行下一步實驗。
本期內容:如何利用PEI轉染細胞呢?
下期內容:怎么選擇瞬時轉染和穩定轉染呢?
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