亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>操作使用>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

293T細(xì)胞在培養(yǎng)的過(guò)程中的特別注意事項(xiàng)有哪些?

來(lái)源:鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司   2024年06月27日 16:57  

 HEK-293T細(xì)胞是293T(293tsA1609neo)細(xì)胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原,該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)染效率較高。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時(shí)),即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作)

293T細(xì)胞的培養(yǎng)條件除了用DMEM(推薦iCell-0001)培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;還要添加L-谷氨酰胺(2mM)1%;NEAA  1% ; 雙抗 1%等添加物,但是293T細(xì)胞在培養(yǎng)的過(guò)程中貼壁能力較弱,在培養(yǎng)過(guò)程中特別要注意:

先,293T細(xì)胞貼壁能力較弱,培養(yǎng)時(shí)可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿。wan全培養(yǎng)液中需添加熱滅活胎牛血清。細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密,過(guò)密細(xì)胞容易脫落,脫落下來(lái)的細(xì)胞可以通過(guò)離心收集,使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后繼續(xù)培養(yǎng)。

其次,如果發(fā)生293T細(xì)胞不貼壁,漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象,請(qǐng)確認(rèn)所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度。并參考以下培養(yǎng)體系:

a) DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成,使用5%CO2培養(yǎng)箱。

b) DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成,使用10%CO2培養(yǎng)箱。

當(dāng)使用碳酸氫鈉含量高的培養(yǎng)基時(shí),必須將這些細(xì)胞在10%CO2中孵育,以便正確緩沖培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)基沒(méi)有適當(dāng)緩沖時(shí),239T細(xì)胞雖然可以存活,但將無(wú)法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。

293T細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:

1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

 

3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

293T細(xì)胞參考文獻(xiàn):

【1】Ding L, Zeng Q, Wu J, et al. Caveolin1 regulates oxidative stressinduced senescence in nucleus pulposus cells primarily via the p53/p21 signaling pathway in vitro[J]. Molecular Medicine Reports, 2017, 16(6): 9521-9527.

 

【2】邱進(jìn), 劉輝, 袁芳, 等. MEF2C 基因啟動(dòng)子區(qū)堿基突變對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響[J]. 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 40(5): 606-611.

【3】Geng F, Lu G F, Ji M H, et al. MicroRNA-26b-3p/ANTXR1 signaling modulates proliferation, migration, and apoptosis of glioma[J]. American journal of translational research, 2019, 11(12): 7568.


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 海门市| 曲靖市| 洪洞县| 漳州市| 都江堰市| 登封市| 共和县| 开封县| 婺源县| 响水县| 乐至县| 夹江县| 马山县| 淳安县| 屏边| 衡东县| 孟村| 土默特左旗| 宣汉县| 寿阳县| 高邮市| 来安县| 石首市| 手游| 建阳市| 日喀则市| 水城县| 奎屯市| 肇源县| 佛山市| 乐都县| 托克逊县| 突泉县| 汨罗市| 山东省| 邹平县| 孝义市| 友谊县| 宜宾县| 体育| 凤阳县|