液相色譜儀的使用教程

液相色譜儀的使用教程詳細步驟如下：

一、開機前準備

1.流動相準備：

根據實驗需求選擇合適的流動相，如甲醇、乙腈、水等，以及相應的添加劑（如緩沖鹽等）。

使用合適的濾膜（有機系或水系，常用孔徑為0.20μm或0.45μm）對流動相進行過濾，以去除雜質。

對過濾后的流動相進行超聲脫氣10~20分鐘，去除溶解在其中的氣體，防止在儀器中形成氣泡影響分析結果。

2.樣品準備：

確保樣品溶解均勻且無雜質。如果樣品是固體，需要將其溶解在合適的溶劑中；如果樣品是液體，需要進行適當的稀釋或前處理。

3.色譜柱選擇：

根據樣品的性質和分析目的選擇合適的色譜柱。例如，對于極性較大的樣品，可選擇反相色譜柱（如C18柱）；對于極性較小的樣品，正相色譜柱可能更合適。

注意色譜柱的規格（如長度、內徑、粒徑等）對分離效果的影響。

二、開機

1.打開硬件設備：先打開計算機，進入操作系統后，再打開液相色譜儀的各個模塊電源，如泵、檢測器、柱溫箱等。

2.打開軟件：雙擊液相色譜儀的工作站軟件圖標，進入軟件操作界面。

三、系統初始化和平衡

1.沖洗系統：

在儀器操作界面中設置泵的參數，用甲醇或其他合適的溶劑作為初始流動相，以一定的流速沖洗整個液相色譜系統，包括泵、管路、進樣閥、色譜柱和檢測器等。

沖洗時間一般為20~30分鐘，目的是去除系統中的雜質和殘留物質，同時檢查系統是否存在漏液等問題。

2.設置柱溫：

根據實驗要求，在柱溫箱上設置合適的溫度，使色譜柱達到穩定的工作溫度。

柱溫的設置需要考慮色譜柱的類型、樣品的性質以及分析方法的要求。

3.基線穩定：

在沖洗過程中，觀察檢測器的信號，等待基線穩定。基線穩定的標準通常是基線的波動在一定范圍內，且在一段時間內保持相對穩定。

這可能需要30分鐘或更長時間，具體取決于儀器的狀態和分析方法。

四、方法設置

1.泵參數設置：設置流動相的流速、比例等參數。如果是梯度洗脫，還需要設置梯度程序，即不同時間點流動相的組成變化。

2.檢測器參數設置：設置檢測波長、帶寬、響應時間等參數。根據樣品的特性和分析目的選擇合適的檢測波長，以獲得檢測效果。

3.其他參數設置：根據實驗需求，還可以設置其他相關參數，如柱溫箱的溫度控制程序、數據采集的頻率等。

五、進樣分析

1.進樣前準備：

如果是自動進樣器，將樣品瓶放入自動進樣器的樣品架上，并在軟件中設置好樣品信息。

如果是手動進樣器，用洗針液洗凈進樣針，再用樣品溶液潤洗進樣針3遍以上，并排除針筒中的氣泡。

2.進樣操作：

對于自動進樣器，在軟件中點擊開始進樣按鈕，自動進樣器會按照設定的程序進行進樣。

對于手動進樣器，將進樣針插入進樣閥的進樣口，緩慢注入樣品溶液，然后切換進樣閥的位置，啟動進樣程序。

進樣完成后，記錄樣品的名稱、進樣時間等信息。

六、數據處理和分析

1.數據采集：在進樣后，液相色譜儀會自動采集樣品的色譜數據，并將其傳輸到計算機上的工作站軟件中。

2.數據處理：對采集到的數據進行處理，包括積分、峰識別、峰面積計算、保留時間確定等。可以根據需要設置積分參數、峰的判定標準等，以獲得準確的分析結果。

3.數據分析：根據處理后的數據，對樣品的組成、含量、純度等進行分析和判斷。可以通過比較樣品的色譜圖與標準品的色譜圖，或者使用標準曲線法等方法進行定量分析。

七、實驗結束后的處理

1.樣品處理：取出樣品瓶，將剩余的樣品進行妥善處理，如回收、廢棄等。

2.系統清洗：

用適當的溶劑（如甲醇、水等）沖洗液相色譜系統，特別是泵、進樣閥和色譜柱等部件，以去除殘留的樣品和流動相。

清洗時間一般為30分鐘以上，確保系統清洗干凈。如果使用過含鹽緩沖液，則必須先用清水沖洗泵15分鐘，再沖洗干凈系統內其他含鹽的部位，最后用純的強溶劑沖洗整個系統以保護色譜柱。

八、關機

1.先關閉液相色譜儀的軟件。

2.依次關閉檢測器、泵、柱溫箱等模塊的電源。

3.關閉計算機。

請注意，不同型號的液相色譜儀可能在操作細節上存在差異，因此在實際使用時，建議參考具體儀器的說明書或咨詢儀器供應商以獲取準確的操作指導。