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無細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進行BLI(Biolayer Interferometry)
近日，珀羅汀生物收到某藥企研發(fā)團隊的反饋：使用兩款PLD無細(xì)胞蛋白表達(dá)試劑（PLDK001、PLDK002），成功實現(xiàn)3個蛋白的高效表達(dá)，并通過BLI檢測無細(xì)胞反應(yīng)后上清快速完成了功能性驗證！
生物層干涉術(shù)（Biolayer Interferometry, BLI）是一種非標(biāo)記的、實時監(jiān)測的先進技術(shù)，主要用于生物分子間或是生物分子與小分子間相互作用分析。在蛋白與配體的相互作用檢測時，基于傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)的蛋白樣品通常需要經(jīng)過復(fù)雜的細(xì)胞破碎、純化等前處理。然而在本案例中，通過無細(xì)胞表達(dá)技術(shù)獲得的重組蛋白，實現(xiàn)了上清液零處理直接BLI檢測！
圖1 ：基于傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的BLI檢測與本案例基于無細(xì)胞表達(dá)（CFPS）的BLI檢測流程對比示意圖
本案例實驗結(jié)果可謂亮點紛呈
1.高可溶表達(dá)：SDS-PAGE清晰顯示，3個蛋白在無細(xì)胞表達(dá)上清液中均呈現(xiàn)強目的條帶（圖1），傳統(tǒng)大腸桿菌系統(tǒng)中易形成的包涵體難題被破解！
圖2： 三個蛋白在PLDK001、PLDK002試劑盒中表達(dá)的SDS-PAGE膠圖
2.低背景：蛋白3經(jīng)BLI（生物膜層干涉技術(shù)）檢測顯示：帶His標(biāo)簽的目的蛋白與背景信號區(qū)分度高（圖3），表明表達(dá)產(chǎn)物背景干擾小，無需復(fù)雜純化即可直接用于下游結(jié)合實驗。
圖3：BLI通過抗His捕獲傳感器可從表達(dá)上清中捕獲蛋白3
3.強親和活性：最令人振奮的是——蛋白2與其配體蛋白的BLI實時結(jié)合曲線顯示典型高效結(jié)合特征，表明該蛋白具有強親和活性！這種無細(xì)胞快速表達(dá)+BLI快速檢測親和活性的方案，將為藥物靶點蛋白篩選貢獻新速度。
圖4：蛋白2與其配體蛋白有強親和活性
無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)：推動靶點蛋白開發(fā)的“高能引擎”
從基因到蛋白，再到活性驗證， 珀羅汀無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)猶如“高能引擎”，推動靶點蛋白極速表達(dá)，為藥物發(fā)現(xiàn)提供“無細(xì)胞速度”。對于分秒必爭的新藥研發(fā)，速度即是壁壘，活性就是王-道！此次客戶的成功實踐，驗證了珀羅汀無細(xì)胞表達(dá)平臺的三重價值：
√ 打破表達(dá)壁壘——高難度蛋白輕松可溶表達(dá)；
√ 跳過純化瓶頸——表達(dá)上清直通活性檢測；
√ 壓縮研發(fā)周期——將傳統(tǒng)數(shù)周流程縮短至數(shù)天！
對比傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，珀羅汀無細(xì)胞技術(shù)在此次案例中展現(xiàn)出壓倒性優(yōu)勢：
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