液體培養(yǎng)法

將菌種接種到合適的液體培養(yǎng)基（如 LB 肉湯）中，在適宜條件下振蕩培養(yǎng)，當菌液 OD600 達到 0.6 - 1.0 左右（不同菌種略有差異），即菌體處于對數(shù)生長后期時，可用于保藏。此階段的菌體生長狀態(tài)良好，保藏成功率更高。

03 菌液與甘油混合

將制備好的濃菌懸液或?qū)?shù)期菌液與無菌的50%甘油溶液混合，使最終甘油濃度保持在15% - 20% (v/v) 。例如，取0.6mL 50%甘油與1.4mL菌液混合，可得到2mL含15%甘油的菌懸液；取0.8mL 50%甘油和1.2mL菌液混合，則可獲得2mL含20%甘油的菌懸液。混合時需輕柔地上下顛倒或渦旋，確保菌液與甘油充分混勻。

04 分裝與標記

迅速將混合均勻的菌液-甘油混合物分裝到無菌的冷凍保存管中，每管分裝 0.5 - 1.0mL 。同時，在管壁和管蓋上清晰標明菌株名稱 / 編號、保存日期、甘油濃度、操作者姓名等信息，以便后續(xù)準確取用和管理。

愛津生物提供多規(guī)格的凍存管，全部采用進口醫(yī)療級聚丙烯（PP）材質(zhì)，具有高透明度、無毒無味，同時具備優(yōu)異的密封性和耐化學(xué)性。它不僅能承受121℃/15psi的高溫高壓滅菌，還能在-196℃至121℃的溫度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，確保實驗安全使用。

05 冷凍保存

可先將凍存管放入-20°C冰箱預(yù)冷1-2小時，隨后轉(zhuǎn)移至-80°C超低溫冰箱進行速凍；也可使用專門的程序降溫盒（如Mr. Frosty）。需避免緩慢冷凍（如在-20°C直接凍存過夜），因為緩慢冷凍會形成較大冰晶，對細胞造成損傷。若需長期保存，可將凍存管置于液氮氣相環(huán)境中，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

PART 03

菌種復(fù)蘇

01 快速解凍

從-80°C冰箱取出目標凍存管后，立即放入37°C水浴（或適合菌種生長溫度的水浴）中，輕輕搖晃，使冰晶在30秒到1分鐘內(nèi)融化。避免室溫緩慢融化，以防活性降低。

02 消毒與接種

用70%酒精擦拭凍存管外壁進行消毒，在無菌環(huán)境下打開管蓋，使用無菌吸頭或接種環(huán)取少量解凍菌液（通常1-2環(huán)或10-50μL），劃線接種到合適的固體平板培養(yǎng)基上，然后在適宜條件下培養(yǎng)。需注意的是，解凍后的菌液不宜再次冷凍，每次使用需取新凍存管，以保證菌種質(zhì)量。

PART 04

注意事項

01 嚴格無菌操作

無菌操作是保藏成功的關(guān)鍵，任何環(huán)節(jié)的污染都可能導(dǎo)致保藏失敗。

02控制甘油濃度

15%-20%是常用的甘油濃度范圍，但不同菌株可能需要優(yōu)化。濃度過低，保護效果不足；濃度過高（超過25%），可能導(dǎo)致細胞因滲透壓失衡而脫水。

03 選擇合適的菌齡

務(wù)必使用對數(shù)生長后期的健康菌體，衰老期的細胞存貨率較低，會影響保藏效果。

04 把控冷凍解凍速度

快速冷凍（-80℃直接凍或程序降溫）和快速解凍能夠顯著提高菌種存活率，緩慢操作會對細胞造成不可逆的損傷。

05 穩(wěn)定保存環(huán)境

-80℃是標準保存溫度，應(yīng)盡量減少冰箱開關(guān)次數(shù)，避免溫度波動。若條件允許，液氮保存效果更佳，但成本相對較高。

06 考慮菌株特性

并非所有微生物都適合甘油保藏，部分對低溫或滲透壓敏感的菌株（如某些古菌、專性厭氧菌、部分病原菌），需要采用特殊方法或保護劑，并嚴格遵守生物安全規(guī)定，在相應(yīng)級別的生物安全實驗室進行操作。

PART 05

高質(zhì)量保藏，從耗材選擇開始

菌種保藏不僅考驗操作規(guī)范性，也依賴于高品質(zhì)的實驗耗材。凍存管、移液吸頭、試劑瓶等耗材的性能，將直接影響菌種的活性與后續(xù)實驗的可重復(fù)性。

自2009年成立以來，愛津生物專注于實驗室耗材研發(fā)與生產(chǎn)！目前產(chǎn)品體系已涵蓋900余種品類，全面覆蓋菌種保存、分子實驗、細胞培養(yǎng)等科研場景，持續(xù)為全球科研機構(gòu)提供穩(wěn)定可靠的實驗耗材整體解決方案。

Company Profile

關(guān) 于 愛 津

愛津生物，成立于2009年

致力于研發(fā)生產(chǎn)生物科研領(lǐng)域所需的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品

專注生命科學(xué)、生物工程技術(shù)和實驗室耗材

堅持不斷優(yōu)化、品質(zhì)至上的原則，將更值得信賴的產(chǎn)品交付于您
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選擇愛津，選擇品質(zhì)