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細胞凍存是保存細胞的重要手段，通過低溫來延緩細胞的生命活動。這種技術使細胞能夠得以保存，在需要的時候，又可以被復蘇用于各種實驗。
19世紀末，科學家開始研究低溫對生物組織的影響。早期的實驗表明，單純冷凍會導致細胞冰晶形成和滲透壓失衡而死亡。1937年，Luyet和Hodapp提出“冰晶損傷”理論，為后續(xù)冷凍保護研究奠定了基礎。1949年，英國科學家在研究精子冷凍時，偶然發(fā)現甘油能顯著提高冷凍后精子的存活率。甘油是一種滲透性冷凍保護劑（CPA），可進入細胞內部，降低冰點并減少冰晶形成。它通過平衡細胞內外的滲透壓，防止細胞在冷凍過程中因脫水而破裂。1959年，科學家發(fā)現二甲基亞砜（DMSO）同樣具有優(yōu)異的冷凍保護效果，尤其適用于哺乳動物細胞。DMSO比甘油更易穿透細胞膜，且毒性較低，迅速成為細胞凍存的標準保護劑之一。1963年Peter Mazur提出冷凍損傷的“兩因素假說”：快速冷凍時，細胞內冰晶形成，破壞細胞膜和細胞器；慢速冷凍時，細胞外冰晶形成導致細胞脫水，胞內溶質濃度升高，造成化學毒性。該理論為程序化慢凍法提供了科學依據。
實驗過程中，大多數細胞的凍存遵循“慢速凍存”的原則，通過程序降溫盒或程序化冷凍儀，控制降溫速率（通常為1°C/min），使細胞在冷凍過程中逐步脫水，避免細胞內結冰。該方法顯著提高了凍存細胞的存活率。
研究表明5%-10%的DMSO*適合細胞凍存，具體比例要根據細胞種類調整，對DMSO敏感的細胞則需要降低比例。根據小尚的經驗，8% DMSO適用于大部分細胞系。同時，還需根據細胞培養(yǎng)難度調整血清比例，越難養(yǎng)的細胞越要多加血清，過于脆弱的細胞可用血清+DMSO凍存，不加培養(yǎng)基。我們常用的凍存液配方是92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦)。
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