細胞簡介

平臺編號：Bio-128988

規格：1×10?Cells/T25培養瓶

細胞信息：DC2.4

細胞名稱：小鼠樹突細胞DC2.4

產品規格：T25培養瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研2類

培養體系：DMEM高糖培養基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）

培養溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：小鼠樹突細胞DC2.4取自C57BL/6小鼠

用途：細胞系

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需復蘇的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化。

2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ，移液槍吸出細胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上培養基并混勻。

3、操作離心 ，調至 1000 轉/分 ，時長 10 分鐘

4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細胞沉淀 ，在 T25 培養瓶中加入 5-6ml 培養基 ，計數 ，調整細胞密度，接種培養瓶 ，37℃培養箱靜置培養。

5、次日更換一次培養液，繼續培養。

6、注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養瓶中

細胞傳代操作說明（貼壁細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、細胞于培養箱中 ，愈合度達到 80% ，可進行傳代。

2、按 T25 培養瓶計，吸出培養基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具體時間視細胞而定），后用培養基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細胞，鋪至 2 個 T25 培養瓶中培養，各添加 7ml 培養基。

3、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮培養基，原瓶培養基不可繼續使用（終止消化或傳代）。

細胞傳代操作說明（懸浮細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、細胞于培養箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。

2、按 T25 培養瓶計，吹打均勻，吸出培養基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細胞，鋪至 2 個T25 培養瓶中培養，各添加 7ml 培養基。

3、注意：原瓶培養基不可繼續使用（傳代）。

細胞凍存操作說明

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需凍存的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管 ，凍存管 ，記號筆

實驗步驟：

1、取待凍存的細胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用培養基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞 ，則可直接離心收集細胞。

2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。

3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。

4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉放-20℃ 1.5～2 h ，再轉人-70℃ 4-12 h 后即可轉移到液氮內(- 196℃) ，并登記。

驗收細胞注意事項

1、收到小鼠樹突細胞DC2.4，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯系。

2、收到小鼠樹突細胞DC2.4，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要打開細胞培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到小鼠樹突細胞DC2.4后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

4、收到小鼠樹突細胞DC2.4時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養基吸出，留下5-10ML培養基繼續培養：超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

5、將培養瓶置于37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。

6、24小時后，小鼠樹突細胞DC2.4已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞，懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液，37℃，5%CO2培養。

特別提醒：原瓶中培養基不宜繼續使用，請更換新鮮培養基培養。

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