一、磁極在磁性細胞分選中的作用原理
磁性細胞分選的核心步驟是:
磁性標記: 目標細胞通過與表面包被有特異性抗體(針對目標細胞表面標志物)的超順磁性微珠結合,從而被“磁化”。
磁場分選: 將標記好的細胞懸液通過或置于細胞分選磁極產生的磁場區域。
分離捕獲:
在高梯度磁場的作用下,結合了磁性微珠的目標細胞會被強大的磁力捕獲并滯留在磁極表面或磁極內部的分離基質(如填充了鐵絲的柱子)上。
未標記的非目標細胞則不受磁場影響(或影響極小),隨液體流穿過磁極區域。
洗脫收集: 移除磁場后,被捕獲的目標細胞失去磁力束縛,即可被洗脫下來進行收集。
磁極的核心作用就體現在第2和第3步: 它提供的高梯度磁場是區分和捕獲磁性標記細胞與非標記細胞的物理基礎。梯度越高,在微小距離上產生的磁力變化越大,對小尺寸磁性微珠的捕獲效率就越高。
二、應用領域
免疫學研究: 分離特定免疫細胞亞群(如T細胞、B細胞、NK細胞、樹突狀細胞、調節性T細胞等)進行功能研究。
干細胞研究: 富集造血干細胞、間充質干細胞等。
腫瘤學研究: 分離循環腫瘤細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞。
細胞治療: 在CAR-T、TCR-T等過繼性細胞免疫治療中,分離、富集或去除特定細胞。
微生物學: 分離特定病原體或微生物。
分子生物學: 分離核酸結合蛋白或特定細胞器(需特殊磁珠)。
診斷: 用于某些體外診斷試劑盒中富集目標分析物。
三、選擇與使用注意事項
匹配分選柱/容器: 磁極必須與所使用的分選柱(如MACS® Column)或樣品容器(如試管、多孔板)的尺寸和形狀精確匹配,以確保最佳的磁場覆蓋和分選效果。
磁場強度與梯度: 根據目標細胞大小、磁珠大小和結合強度選擇合適的磁極(通常廠商會標明其磁極性能)。處理難分細胞或需要ji高純度時,可能需要更強磁場或更高梯度的磁極。
操作規范: 嚴格按照分選試劑盒或儀器說明書操作,包括上樣速度、緩沖液選擇、洗滌次數等,這些都會影響磁極的捕獲效率和最終分選純度/得率。
維護: 永磁體磁極避免劇烈撞擊、高溫和強反向磁場,以防退磁。電磁體注意散熱和電路維護。
四、常見問題 (FAQ)
Q:磁極的磁場會傷害細胞嗎?
A:磁場本身對細胞沒有已知的直接傷害。分離的溫和性主要源于磁珠與細胞的特異性結合以及低剪切力的操作過程。
Q:永磁體和電磁體哪個更好?
A:各有優勢。永磁體簡單便攜成本低,適合手動操作和小樣本;電磁體可控性強,便于自動化,適合大樣本和需要精確控制磁場的應用。
Q:為什么需要高梯度磁場?
A:細胞攜帶的磁性微珠體積小、磁矩有限。高梯度磁場能在微小空間內產生足夠強的磁力,確保這些小磁珠(及其標記的細胞)被有效捕獲,而不僅僅是強磁場(均勻磁場對小磁珠作用力很弱)。
Q:分選純度/得率不高可能和磁極有關嗎?
A:有可能。磁極磁場強度不足、梯度不夠、與分選柱/容器不匹配、或操作不當(如流速過快)都可能導致捕獲效率下降,影響得率和純度。但更多時候需先排查抗體-磁珠標記效率、樣本制備、緩沖液等因素。
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