木質素是植物細胞壁的主要成分之一，是一種復雜的芳香族高分子聚合物，其結構由多種單體通過氧化聚合反應形成。木質素單體主要包括香豆醇、松柏醇和芥子醇三種類型。香豆醇形成對羥基木質素，多存在于草本植物中；松柏醇形成愈創木基木質素，在針葉樹中含量豐富；芥子醇形成紫丁香基木質素，常見于闊葉樹中。這些單體的比例和結構因植物種類、生長階段和組織部位的不同而存在差異，其組成特征對于研究植物的分類、生長代謝以及木質素的利用具有重要意義。

HPLC 法檢測木質素單體的原理

高效液相色譜法（HPLC）是檢測木質素單體的常用方法，其原理基于不同木質素單體在固定相和流動相之間分配系數的差異實現分離，再通過檢測器進行定性和定量分析。

在 HPLC 系統中，固定相通常為填充了特定吸附劑（如十八烷基硅烷鍵合硅膠，ODS）的色譜柱，流動相則是由有機溶劑（如甲醇、乙腈）和水（有時添加酸或緩沖液調節 pH）組成的混合溶液。當經過前處理的含有木質素單體的樣品進入色譜柱后，各單體在固定相和流動相之間進行反復的吸附 - 解吸分配過程。由于不同單體與固定相的作用力（如疏水作用、氫鍵作用等）不同，它們在色譜柱中的保留時間存在差異，從而實現分離。分離后的單體依次進入檢測器（常用紫外檢測器），檢測器根據各單體對特定波長光的吸收特性產生相應的信號，信號強度與單體的濃度成正比，通過與已知濃度的標準品對比，可確定樣品中各木質素單體的含量。

HPLC 法檢測木質素單體的步驟

樣品前處理：這是檢測過程中至關重要的一步，目的是將木質素從植物樣品中提取出來并降解為單體。常用的方法包括酸水解法、酶解法等。例如，酸水解法是將植物樣品與濃酸（如硫酸）在一定條件下反應，使木質素發生降解，釋放出單體。隨后進行中和、萃取、凈化等操作，去除雜質，得到適合進樣的樣品溶液。

標準品配制：配制一系列不同濃度的木質素單體標準品溶液，用于繪制標準曲線。

色譜條件設置：根據木質素單體的性質，選擇合適的色譜柱、流動相組成及比例、流速、柱溫、檢測波長等參數。例如，流動相可采用甲醇 - 水混合溶液，流速設為 1.0 mL/min，柱溫為 30℃，檢測波長為 280 nm（因木質素單體含有芳香環，在該波長下有較強吸收）。

進樣分析：將處理好的樣品溶液和標準品溶液分別注入 HPLC 系統，記錄色譜圖。

數據處理：根據標準品的保留時間確定樣品中各木質素單體的峰位，通過峰面積與標準曲線對比，計算樣品中各單體的含量。

HPLC 法檢測木質素單體的優勢

分離效率高：HPLC 能夠有效分離結構相似的木質素單體，即使是同分異構體也能實現較好的分離效果，確保檢測結果的準確性。

靈敏度高：采用高靈敏度的檢測器（如紫外檢測器、熒光檢測器等），可檢測到樣品中低至微克甚至納克水平的木質素單體，適用于微量分析。

定量準確：通過標準曲線法進行定量，線性范圍寬，重現性好，能夠準確測定樣品中各木質素單體的含量。

操作簡便：自動化程度高，樣品前處理完成后，進樣分析過程可由儀器自動完成，減少了人為誤差。

應用范圍廣：適用于多種植物樣品（如木材、草本植物、農作物秸稈等）中木質素單體的檢測。