根據GB/T 18281.1-2024 《醫療保健產品滅菌 生物指示物 第1部分:通則》生物指示劑的培養時間一般為7天。但是在接收成品生物指示劑時,你可能會發現說明書上標示的生物指示劑培養時間是7天、48h、24h,甚至是更短的3h、30min,這些小于要求的培養時間是怎么確定的呢?
縮短生物指示劑培養時間需依據ISO 11138-8:2021《Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator》開展實驗,根據實驗結果確認最短的培養時間。該標準的等同替代國家標準為GB/T 18281.8 - 2024《醫療保健產品滅菌 生物指示物 第8部分:縮短生物指示物培養時間的確認方法》,于2024年11月發布,將于2026年06月正式實施。
以泰林SS6-121型自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑的縮短培養時間測試結果為例,我們詳細介紹如何確認生物指示劑的縮短培養時間。
確認生物指示劑在部分周期滅菌的條件,使生物指示劑在此周期中滅菌,培養7天后預期有30%~95%呈現陽性。
將待測批次生物指示劑在抗力儀中121℃滅菌16min,培養7天后,生物指示劑的陽性率為70%,認為該滅菌時間符合預期要求;假如在相同條件下,生物指示劑培養7天后的陽性率低于30%或高于95%,則認為該滅菌時間不符合預期,需要調整滅菌時間,使滅菌后生物指示劑的陽性率在30%~95%之間;表1介紹了該款生物指示劑滅菌時間的篩選過程,三批次生物指示劑在滅菌時間為16min時,陽性率在40%~65%之間,均符合要求。可以確認后續的滅菌條件為:121℃,16min。
取3批次該產品,每批次100支生物指示劑,按照步驟(01)中確認的滅菌時間進行殺滅,即抗力儀中121℃滅菌16min。
殺滅結束后,按說明書要求進行接種操作,并轉移至規定的培養條件下培養7天。按照預先確定的時間間隔,記錄生物指示劑的陽性結果和陰性結果。例如,設定的時間間隔為24h,每隔24h進行結果記錄,最終的培養時間結果以“h”為單位。測試結果見表2。
在相同的培養時間間隔下,3批次生物指示物陽性的數量與第7d的陽性生物指示物數量之間的相關度≥97%,即表2中“生長比例”≥97%,可以確認為最短的培養時間。計算公式如下:
由表2可知,第一次批次和第二批次指示劑在培養24h時,生長比例均<97%,無法以“24h”作為最短培養時間;當培養時間為48h時,三批次生物指示劑的生長比例均為100%,滿足標準中“≥97%”的要求,可以選擇48h作為該生物指示劑的最終培養時間。因此,泰林SS6-121型自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑的說明書標示的培養時間為48h。
目前,該方法在醫療器械、醫院等應用廣泛,如快速生物指示劑(培養時間一般為3h)、極速生物指示劑(培養時間一般為30min),這些生物指示劑呈陽性的確認主要通過檢測生物指示劑的熒光強度。2023版《藥品GMP指南》中明確指出,ISO 11138-8:2021《Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator》中描述了縮短培養時間的方法,只適用于特定行業(如醫院或者醫療保健機構)下和某些生物指示劑,并不適用于制藥行業。
ISO 11138-8規定的縮短生物指示劑培養時間的確認方法,確認滅菌時間后至少需要3批次生物指示劑,各100支,通過持續觀察滅菌后生物指示劑陰性、陽性的數量,以確認最短的培養時間。
那么,現在你理解縮短生物指示劑培養時間是如何確認的了嗎?
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