銅綠假單胞菌增菌肉湯是一種選擇性液體培養(yǎng)基，用于從復(fù)雜樣本（如臨床標(biāo)本、環(huán)境樣本或食品）中富集和選擇性培養(yǎng)銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。以下是其原理和使用方法的詳細(xì)說明：

一、原理

1、選擇性抑制

培養(yǎng)基中添加溴棕三甲銨或其他抑制劑，可抑制大多數(shù)革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌的生長，但對銅綠假單胞菌的抑制作用較弱，從而實(shí)現(xiàn)選擇性富集。

2、營養(yǎng)支持

含有蛋白胨、甘油等成分，提供銅綠假單胞菌生長所需的碳源、氮源和能量，促進(jìn)其快速增殖。

3、代謝指示

銅綠假單胞菌代謝過程中會產(chǎn)生綠膿菌素（Pyocyanin）和熒光素（Pyoverdine），使培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍(lán)綠色熒光或綠色色素（需紫外燈觀察）。

二、使用方法

1、樣本處理與接種

樣本類型：水樣、拭子、組織、食品等。

前處理：

液體樣本（如水）可直接接種；固體樣本需均質(zhì)后取懸液。

若樣本中菌量低，可先預(yù)增菌（如緩沖蛋白胨水）。

接種量：按1:10比例將樣本加入肉湯（如10 mL肉湯接種1 mL樣本）。

2、培養(yǎng)條件

溫度：35–37°C

時間：18–24小時（若菌量低，可延長至48小時）

需氧條件：靜置培養(yǎng)或輕微振蕩。

3、結(jié)果觀察

渾濁度：陽性樣本肉湯變渾濁。

色素產(chǎn)生：

肉眼可見藍(lán)綠色或黃綠色（綠膿菌素）。

紫外燈下（365 nm）觀察熒光（熒光素）。

陰性結(jié)果：澄清無變化。

4、確認(rèn)試驗

取培養(yǎng)液劃線接種至選擇性瓊脂，35°C培養(yǎng)18–24小時。

典型菌落特征：扁平、邊緣不規(guī)則、產(chǎn)生色素或熒光。

進(jìn)一步生化鑒定（如氧化酶試驗、42°C生長試驗、分子檢測等）。

三、注意事項

1、質(zhì)量控制

陽性對照：銅綠假單胞菌（ATCC 27853）應(yīng)生長良好并產(chǎn)色素。

陰性對照：大腸桿菌（ATCC 25922）應(yīng)被抑制。

2、干擾因素

樣本中高濃度抑制劑（如抗生素）可能影響增菌效果。

某些假單胞菌（如熒光假單胞菌）可能產(chǎn)生類似色素，需結(jié)合生化鑒定。

3、儲存與保質(zhì)期

未開封干粉培養(yǎng)基常溫保存，配制后冷藏（2–8°C）并在1個月內(nèi)使用。

四、應(yīng)用場景

臨床：檢測傷口感染、呼吸道標(biāo)本中的銅綠假單胞菌。

環(huán)境監(jiān)測：醫(yī)院用水系統(tǒng)（如水管、呼吸機(jī)）的污染檢測。

食品工業(yè)：評估飲用水或原料的微生物安全性。

通過選擇性增菌，該肉湯可顯著提高銅綠假單胞菌的檢出率，尤其適用于低菌量或含競爭菌群的復(fù)雜樣本。

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