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PDX模型(Patient-Derived Tumor Xenograft)通過將患者腫瘤組織移植至免疫缺陷小鼠體內，構建出高度保留原發腫瘤異質性和生物學特性的移植瘤模型。其制作流程可分為樣本獲取與預處理、小鼠準備與移植、移植瘤監測與傳代三大核心階段，具體操作如下：
一、樣本獲取與預處理
樣本來源
手術切除的腫瘤組織、活檢樣本或惡性胸腹水沉淀物。
優先選擇新鮮樣本(離體時間≤2小時)，避免凍存后成瘤率下降；化療后樣本因細胞活性降低，移植成功率顯著降低。
預處理操作
清洗與剔除：將組織置于含雙抗的PBS緩沖液中，剔除壞死組織和正常組織，減少非腫瘤細胞干擾。
組織分塊：
預留樣本：取部分組織(150-300mm³)置于福爾馬林中固定(用于病理分析)或液氮凍存(作為備份)。
移植用組織：剩余組織剪成20-30mm³小塊(異位移植)或<1mm³微塊(原位移植，如腎包膜下接種)。
基質膠包裹：原位移植前，將微塊用基質膠包裹以增強黏附性，提高成瘤率。
二、小鼠準備與移植
小鼠品系選擇
重度免疫缺陷小鼠：如NOD/SCID、NSG(NOD-scid-Il2rgnull)或NCG(NOD/ShiltJGpt-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Gpt)小鼠，因缺乏T、B、NK細胞，移植成功率更高。
血液瘤模型：需全身輻照進一步抑制免疫系統，防止排斥反應。
移植方式
異位移植(皮下接種)：
操作：將組織塊用套針接種至小鼠腋下背部或后腿部皮下，每只小鼠可接種2-4個部位。
優勢：操作簡單，便于觀察腫瘤生長；血供豐富區域(如腋窩)成瘤率更高。
原位移植：
腎包膜下接種(SRC)：
麻醉小鼠后，在肋脊角靠下位置備皮、消毒。
切開皮膚，分離皮下和側腹膜，暴露腎臟。
用鑷子戳開腎被膜，將2-3塊微塊腫瘤組織送入腎被膜下。
縫合腹膜、皮下組織和皮膚，消毒后放回飼養籠。
優勢：模擬原發腫瘤微環境，成瘤率更高(尤其適用于肝癌等實體瘤)。
血液瘤移植：
尾靜脈注射：將患者骨髓或外周血分離的腫瘤細胞經尾靜脈注入，模擬全身擴散。
肝內注射：直接注入肝臟，縮短成瘤周期，但手術技術要求高。
三、移植瘤監測與傳代
生長監測
定期觀察：每日檢查小鼠健康狀態，記錄腫瘤出現時間。
體積測量：腫瘤生長至5mm×5mm時，用游標卡尺測量長徑(L)和短徑(W)，按公式
成瘤標準：體表瘤生長至800-1000mm³時處死小鼠，取瘤組織標記為F1代；無可見成瘤動物觀察4-6個月，未成瘤視為失敗。
傳代培養
F1代處理：取F1代腫瘤組織，重復上述移植步驟，構建F2代，依此類推。
樣本保存：每代移植瘤均需凍存部分組織(液氮或-80℃)，保留基因組DNA、RNA和蛋白樣本，以備后續分析。
質量控制：通過病理學分析、基因表達檢測等驗證傳代瘤與原發腫瘤的一致性。
四、關鍵影響因素與優化策略
成瘤率提升
組織大小：適中體積(20-30mm³)平衡細胞數量與營養供應，避免過大導致中心壞死。
移植部位：腎包膜下因血供豐富，成瘤率顯著高于皮下。
小鼠品系：NSG小鼠因免疫缺陷更徹底，成瘤率優于NOD/SCID小鼠。
操作規范
無菌環境：所有操作在SPF動物房超凈臺內完成，防止感染導致小鼠死亡。
麻醉與鎮痛：原位移植需嚴格麻醉小鼠，術后注射鎮痛劑減少應激。
快速處理：樣本離體后盡快處理，避免細胞活性下降。
五、應用與局限性
應用：PDX模型廣泛用于藥物篩選(臨床相關性達87%-90%)、個性化治療預測及腫瘤機制研究。
局限性：構建周期長(4-6個月)、成本高，且部分癌種(如皮膚T細胞淋巴瘤)早期階段難以成瘤。
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