一、產品信息

平臺編號：Bio-106000

規格：1×10?Cells/T25培養瓶

細胞信息：永生化細胞

細胞名稱：大鼠腦微血管內皮細胞

用途：（免疫熒光鑒定）

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

二、細胞詳述

腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦。大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。

腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產生很高的跨內皮阻抗，延遲細胞旁的通量；腦微血管的內皮細胞間銜接得十分緊密，不象其他組織的血管內皮細胞那樣有較大的縫隙腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構，其液相物質胞飲水平較低；腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統，從而產生 “兩極分化”的表現型。 與外周內皮細胞相同，大腦微血管內皮細胞表面表達細胞粘附分子，調控白細胞進入大腦。由于微血管內皮細胞的器官特異性，內皮細胞通常取源于疾病研究的相關組織。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。

三、細胞特性

1)組織來源于實驗動物的腦組織。

2)細胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽性。

3)經鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規則細胞，貼壁培養。

四、產品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養瓶充滿培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

五、產品使用

1)本產品僅能用于科研

2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核

3)本產品未通過用于活體診斷的審核

六、培養步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。棄培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入到凍存液中。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3、輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4、按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

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