提前平衡試劑溫度:從冰箱取出試劑盒后,建議將試劑放置在室溫下平衡 15 - 30 分鐘再使用。這樣做能避免因試劑溫度過低,在混合過程中導致溶液局部過冷,影響聚合加速劑的活性,進而影響凝膠聚合效果。比如在冬天,直接使用低溫試劑可能使凝膠聚合時間延長,甚至出現聚合情況。
精準量取液體:使用移液槍量取去離子水或緩沖液時,要確保移液槍的量程合適且校準準確。對于小體積液體量取,可選擇精度更高的微量移液器,量取時緩慢吸液和放液,避免產生氣泡和誤差。此外,量取不同液體時,及時更換槍頭,防止交叉污染影響凝膠質量。
預混試劑充分搖勻:如果試劑盒中的預混試劑長時間放置出現分層現象,使用前需將其充分搖勻。可以上下顛倒試劑瓶多次,或者使用渦旋振蕩器低速振蕩,使各成分重新均勻混合,確保凝膠各組分濃度一致,保障凝膠質量穩定。
灌注凝膠的小竅門:灌注凝膠時,可先將電泳槽傾斜一定角度(約 30° - 45°),然后將凝膠溶液沿電泳槽一側緩慢倒入。這樣能減少溶液與空氣的接觸面積,有效避免氣泡產生。同時,在倒入凝膠溶液的過程中,保持勻速緩慢的速度,有助于使凝膠溶液更均勻地填充凝膠腔。
梳子處理技巧:插入梳子前,可在梳子的齒上涂抹一層薄薄的凡士林或電泳緩沖液,這樣能在拔梳子時起到潤滑作用,使梳子更容易拔出,減少對加樣孔的損壞。拔梳子的最佳時機是在凝膠剛剛聚合完成且仍具有一定彈性時,此時輕輕垂直向上拔出梳子,能保持加樣孔的完整形狀。
氣泡處理經驗:若在灌注過程中不慎產生氣泡,除了用細針挑破外,還可以用注射器連接細長的針頭,將針頭插入氣泡下方,緩慢抽出氣泡。如果氣泡較多且分布在凝膠表面,可將灌注好凝膠的電泳槽放置在水平搖床上,以低速搖晃幾分鐘,利用離心力使氣泡集中到表面后再進行處理。
聚合異常處理:如果發現凝膠在預期時間內未聚合,首先檢查試劑是否在有效期內,以及試劑混合比例是否準確。若試劑沒問題,可嘗試將凝膠放置在溫度稍高(不超過 30℃)且干燥的環境中,加速聚合反應。但要注意溫度不宜過高,否則會導致凝膠孔徑不均。若凝膠聚合速度過快,出現局部過熱或凝膠表面不平整的情況,可適當降低環境溫度,或減少聚合加速劑的用量(若試劑盒允許調整)。
條帶異常分析:當電泳后出現條帶模糊、拖尾或扭曲等異常情況時,除了考慮樣品和電泳條件的因素外,也可能與凝膠制備有關。若凝膠中存在微小顆粒或雜質,會影響蛋白質遷移,導致條帶異常。此時可檢查試劑混合是否充分,器具是否清潔干凈。若凝膠濃度不均勻,也會造成條帶分離效果差,這就需要嚴格把控試劑配比和混合過程。
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