相較于其他依賴復雜化學相互作用(如離子交換、親和作用)的色譜方法,國產凝膠滲透色譜僅基于分子物理尺寸差異進行分離,無需繁瑣的衍生化步驟或嚴苛的洗脫條件優化。只要選擇合適的凝膠孔徑范圍,就能對寬分子量分布的聚合物、蛋白質等混合物快速分離,大大縮短分析周期,提升實驗效率。
從高分子量的聚合物(如聚乙烯、聚苯乙烯等)到低分子量的有機小分子、多糖,乃至生物大分子中的蛋白質復合物、核酸等,國產凝膠滲透色譜均可應對。其能承受較寬的流速范圍與多樣的溶劑體系,無論是極性還是非極性溶劑溶解的樣品,都有機會在這“通用篩”上得到準確剖析,為多學科研究提供有力支撐。
分離過程中,樣品分子與凝膠填料間僅為物理接觸,不存在強化學吸附或反應導致的結構破壞、活性喪失問題。而且在洗脫環節,各組分能高效富集收集,回收率常常高達接近 100,利于后續對分離組分的進一步研究利用,如純度檢測、結構表征或功能測試等。
由于分離原理的線性與穩定性,國產凝膠滲透色譜在測定樣品中不同分子量組分的相對含量時表現出色。通過與標準品對照或建立校正曲線,能夠準確量化各組分占比,為高分子材料的性能評估(如分子量分布對強度、韌性影響)、生物制品的質量控制(如蛋白質藥物的聚合態監測)提供關鍵數據依據。
國產凝膠滲透色譜(GPC)的測定步驟:
1.前期準備:
-樣品溶解:選取合適溶劑溶解樣品,難溶樣品可加熱、攪拌或超聲輔助。注意控制樣品濃度,一般為2 -5mg/mL。
-樣品過濾:用特定孔徑濾膜(有機相樣品用0.45μm濾膜,水相樣品用0.22μm濾膜)過濾樣品溶液,去除雜質和不溶物。
-儀器預熱:打開儀器電源,啟動泵系統,讓流動相循環使儀器達穩定工作狀態,同時檢查儀器各部件是否正常。
2.參數設置:
-流動相選擇與流速設定:根據樣品性質和色譜柱要求選流動相,常見有四氫呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等。流速一般在0.5 -1.5ml/min之間,避免過快影響分離效果或過慢延長分析時間。
-柱溫設定:依樣品和色譜柱情況選柱溫,通常在20 -60℃之間,溫度影響分子運動和與固定相作用。
-檢測器參數設置:按檢測器類型設參數,如示差折光檢測器設靈敏度、衰減等,紫外檢測器設檢測波長等。
3.樣品進樣:
-手動進樣:若為手動進樣器,用注射器吸取50 -100μl樣品溶液,插入進樣口緩慢注入,避免氣泡和漏液。
-自動進樣:若配備自動進樣器,按操作界面提示設進樣體積、速度等參數,將樣品溶液放樣品盤中,儀器自動進樣。
4.數據采集與分析:
-基線穩定:樣品進柱前等基線穩定,確保數據準確。
-數據采集:樣品進柱后,檢測器實時檢測組分濃度變化并轉化為電信號傳輸給數據采集系統,記錄各時間點檢測信號強度形成色譜圖。
-數據分析:據色譜圖得各組分保留時間、峰面積、峰高等信息,計算樣品分子量分布、平均分子量等參數,還可與標準樣品色譜圖對比定性未知組分。
5.儀器清洗與維護:
-清洗色譜柱:分析結束后用合適溶劑清洗色譜柱,去除殘留樣品和雜質,清洗時間和流速可調整。
-關機:清洗完成后關泵系統和檢測器電源,按操作規程關儀器總電源,清潔維護儀器。
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