除了 EB 和 SafeGreen,核酸染料家族還有許多成員,它們因不同的特性在各類實驗中發揮作用。我將從安全性、靈敏度、適用場景等方面,為你介紹其他常見核酸染料:
SYBR Green I:這是一種較為常用的核酸染料,屬于花箐類染料。它能與雙鏈 DNA(dsDNA)小溝結合,結合后熒光信號會顯著增強,靈敏度較高,可檢測到低至皮克級的 dsDNA 。SYBR Green I 適用于實時熒光定量 PCR(qPCR),在 PCR 反應過程中,它會隨著雙鏈 DNA 的合成不斷嵌入,通過檢測熒光強度變化,實時監測 PCR 進程。不過,SYBR Green I 也存在一定局限性,它不僅能與 dsDNA 結合,還會與單鏈 DNA(ssDNA)、RNA 發生非特異性結合,可能產生較高的背景信號,影響實驗結果的準確性,因此在使用時需注意優化實驗條件 。
GoldView:是一種可替代 EB 的核酸染料,分為 GoldView I 和 GoldView II 。GoldView I 適用于瓊脂糖凝膠電泳染色,其靈敏度與 EB 相當,能清晰顯示核酸條帶。與 EB 相比,GoldView 的細胞毒性較低,對實驗人員和環境相對友好。它在紫外光激發下可發出綠色熒光,操作較為簡便。但 GoldView 的穩定性相對較差,長時間儲存可能會影響染色效果,且在某些實驗條件下,其熒光強度可能不如一些新型核酸染料 。
GelRed 和 GelGreen:這兩種染料均為花箐類二聚體核酸染料,具有高靈敏度、低毒性的特點。GelRed 專用于 dsDNA 染色,GelGreen 則可用于 dsDNA、ssDNA 和 RNA 染色 。它們的分子結構使其能夠緊密結合核酸,染色后條帶清晰,背景信號低,尤其適用于高分辨率瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。此外,GelRed 和 GelGreen 可被標準的紫外凝膠成像系統和藍光透射儀激發,使用方便,且在實驗過程中對核酸遷移的影響較小,能準確反映核酸片段的大小 。
SYBR Safe:是一種安全型核酸染料,常用于瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。它的化學穩定性高,與多種電泳緩沖液兼容 。SYBR Safe 對細胞的毒性較低,且致突變性極弱,在保障實驗人員安全方面表現良好。該染料靈敏度高,能檢測到微量核酸,并且與核酸結合后,在藍光或紫外光激發下可產生強熒光信號,適用于從核酸分離到回收的多種實驗流程 。不過,SYBR Safe 在 qPCR 中的應用相對較少,主要還是集中在凝膠電泳檢測領域 。