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這項研究利用的 shRNA 對單一基因T 的功能在造血分化過程中進行了成功干擾, 并表明干擾T的表達影響造血分化的效率, 因此對新基因在造血分化過程中作用機理的研究具有良好的應(yīng)用前景。由于利用細(xì)胞單層的方式進行分化, 可以方便進行較大規(guī)模的操作, 因此可與 RNA 干擾文庫結(jié)合,進行一定規(guī)模的功能篩選, 這也是本研究未來的發(fā)展方向。
目前已有的方法大多依賴于血清或者基質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng), zui近 Wang 等人和 Yu 等人也報道了“三步法”采用單層的方法分化產(chǎn)生造血前體細(xì)胞并證明RA及TGF-β信號通路在調(diào)控造血分化過程中非常重要。這是從信號通路的層面利用化學(xué)小分子進行機理研究的成功例子. 但是, 利用化學(xué)小分子進行調(diào)控信號通路的機理研究有很大的局限性。首先, 可專一調(diào)控信號通路的小分子有限, 對轉(zhuǎn)錄因子等不具有特異化學(xué)抑制劑分子的基因功能研究則無法進行。
人胚胎干細(xì)胞具有分化為造血前體細(xì)胞及各種功能血細(xì)胞的潛能。但是, 目前的分化篩選模型定向誘導(dǎo)分化效率很低, 分化程序復(fù)雜且較難建立, 分化的細(xì)胞功能存在缺陷。來自中國醫(yī)學(xué)*&北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，南開大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院的研究人員近期采用分步法在不依賴血清及基質(zhì)細(xì)胞的條件下, 建立了一種分化產(chǎn)生造血前體細(xì)胞的方法。
人胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells, iPS cells）統(tǒng)稱為人多能干細(xì)胞, 理論上其具有分化為人體各種功能細(xì)胞, 用于研究人類早期發(fā)育與器官形成、藥物篩選及細(xì)胞治療等。
早期的研究表明, 人胚胎干細(xì)胞可分化為具有集落形成能力的造血前體細(xì)胞。此后, 采用“擬胚體”或者來自骨髓、胎肝等組織的基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的方法, 先后將人胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、NK 細(xì)胞及 T 細(xì)胞等血細(xì)胞。將體外分化獲得的造血前體細(xì)胞進一步進行體內(nèi)移植, 可獲得少量的分化血細(xì)胞。但是, 目前已有的分化體系需要依賴基質(zhì)細(xì)胞、血清及生長因子, 而且分化效率很低, 重復(fù)性差, 分化時間長, 分化獲得的造血前體細(xì)胞體內(nèi)移植能力非常低。造成分化程序不完善和不統(tǒng)一的zui重要原因是對人胚胎干細(xì)胞造血分化的實時動態(tài)信號知之甚少, 對分化的機理認(rèn)識不足。因此, 建立一種可針對人胚胎干細(xì)胞早期造血分化過程進行基因功能篩選的方法將有利于揭示起始和調(diào)控分化的實時信號, 為設(shè)計的分化策略提供理論基礎(chǔ)。
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