應(yīng)用硫酸銨鹽析及DEAE-纖維素層析法提純化的IgG，不僅操作復(fù)雜、需時(shí)較長(zhǎng)，處理過(guò)程中樣品體積大大增加，而且透析時(shí)變性嚴(yán)重，容易引起抗體效價(jià)降低等。為了克服這一不足，特別是當(dāng)大量提取IgG時(shí)，則往往采取下列的簡(jiǎn)易辦法。

一、DEAE-纖維素直接提取法

取樣品直接過(guò)DEAE-纖維素柱。下面介紹的是zui為簡(jiǎn)單的燒杯法。

1、以一定數(shù)量的DEAE52放入燒杯中，加入0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液，靜置30min，去上清細(xì)粒，再重復(fù)一次。

2、用布氏漏斗（內(nèi)放兩層濾紙）過(guò)濾。

3、以5g濕重的DEAE-纖維素加1ml血清及3ml蒸餾水混合液的比例，加入各成分，充分?jǐn)嚢琛?/p>

4、于4℃中放置1h，中間攪拌數(shù)次。

5、用布氏漏斗抽濾，再用0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液沖洗纖維素，抽濾。濾液即為提取的IgG液。

二、DEAE－SephadexA－50提純法

DEAE－SephadexA－50為弱堿性陰離子交換劑，經(jīng)NaOH將Cl-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白，血清中除γ－G屬中性蛋白外其余均屬酸性蛋白。當(dāng)溶液的pH在6.5時(shí)，酸性蛋白均被DEAE－SephadexA－50吸附，只有γ－G留在溶液中。因此利用這一原理可以提取 γ－G。這種提取法流程大大縮短，純化前后樣品體積變化不大，而且所得γ－G無(wú)變性現(xiàn)象。經(jīng)過(guò)四次處理，其純度也較好。缺點(diǎn)是收集量少，損耗大。

1、DEAE—SephadexA—50的處理。取DEAE－SephadexA－50若干克，懸浮于蒸餾水中，1h后傾去上層小顆粒，然后用 0.50Mol/L NaOH處理1h，蒸餾水洗至中性，再用0.5 Mol/L HCl處理0.5h，水洗至中性，zui后以0.01Mol/L pH6.5PB液平衡、抽干。

2、取一定的血清量，加等量的0.01Mol/L pH6.5PB液，再加液體體積1/4的濾干的DEAE－SephadexA－50，混合、4℃放置1h，不時(shí)攪拌、抽濾、收集濾液。

3、再用同樣重量的DEAE－SephadexA－50處理濾液。反復(fù)處理三次。（全程共四次）。獲得濾液即為γ－G制品。

4、DEAE－SephadexA－50的回收。用0.5Mol/L的Na2HPO4洗脫，抽濾至濾液中無(wú)蛋白（OD280﹤0.04）后，再用蒸餾水洗至中性即可回收使用。