PCR實驗室設計說明

來源：深圳市賽特實驗室工程有限公司 2015年03月04日 14:36

PCR實驗室要求
1 實驗室功能分區
1.1 實驗室原則上應分為4個獨立工作區,實分三個獨立工作區
試劑準備區、樣品處理區、擴增產物分析區，并設在不同房間。前兩區為擴增前區，后區為擴增后區。各區的功能是：
1.1.1 試劑準備區：擴增試劑的配制、分裝和保存。
1.1.2 樣品處理區：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。
1.1.3 擴增產物分析區：擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。
1.2 擴增前區與擴增后區應嚴格分開，須使用不同的房間，兩區之間有一定的間隔。
1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配制。
1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區和試劑準備區可設在同一房間內：
1.4.1 在生物安全柜內操作。
1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法對操作區域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。推薦的程序是：
（1）實驗前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。
（2）移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進行試驗。
（3）一個實驗區域在同一時間段只進行一種實驗。
（4）實驗結束后，移出個人材料至個人區域保管；封好污染材料盛放器皿并移至污物袋；移出共享器具至專門區域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15min。
1.5 各區域的儀器、設備、器具、工作服和試劑應為該區，不得交叉使用。
2 人員
進行HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術培訓。
3 設施和設備
3.1 根據檢測項目配備相應的設施和設備。
3.2 各區域的設施和設備應為區域性，開展特定試驗時應根據要求在相應區域放置設備。以下是各區域應配備的設備：
3.2.1 試劑準備區：冰箱、潔凈工作臺、離心機、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。
3.2.2 樣品處理區：冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器。
3.2.3 擴增產物分析區：冰箱、離心機、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、核酸污染物處理設備等。
3.2.4 配備-80℃冰箱。
3.3 各區域應備有工作人員的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套，必要時配備防護眼鏡和/或口罩。
1.1.1 PCR 實驗室基本要求
2.1 PCR 實驗室依據所使用的方法可分為試劑準備、標本制備、擴增產物分析等三個區域。只是使用實時熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實驗室，有上述前面三個區域即可。各區域應*獨立分隔，不應有任何的空氣直通。
2.2 產物分析區或三個區域的zui后一個區域（即擴增及產物分析區），空氣流向應由室外向室內，可通過在室內設置通風櫥、排風扇或其他排風系統達到空氣流由室外向室內流動的要求。
2.3 PCR實驗室各區域儀器設備配備通常如下：
2.3.1 試劑準備區:
儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動紫外燈等。可使用超凈工作臺作為試劑配制操作臺面。
2.3.2 標本制備區
儀器設備主要應有生物安全柜（為B2, 可避免提取核酸在柜內反復循環，造成標本間交叉“污染”，出現假陽性結果。此外還應配備加樣器、臺式高速離心機（冷凍及常溫）、臺式低速離心機、恒溫設備（水浴和/或干浴儀）、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。
2.3.3 擴增產物分析區
主要儀器就是核酸擴增熱循環儀（PCR儀，實時熒光或普通的）。熱循環儀的電源應，并配備一個穩壓電源或UPS，以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響。此外，根據工作需要，還可配備加樣器、超凈臺等。
本區所使用的儀器設備可能有加樣器、電泳儀（槽）、電轉印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀和洗板機等。
建議
在理想情況下，PCR實驗室試劑準備、標本制備、擴增三個區域可設置緩沖間。在緩沖間內，可設置正壓，使室內空氣不流向室外，室外空氣不流向室內。
標準的PCR實驗室簡介
1、主體結構：
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金50內圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。
2、標準的三區分隔和氣壓調節：
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區。整個區域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區設置有緩沖區，同時各區通過氣壓調節，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環境的污染。
可打開緩沖區Ⅰ，緩沖區Ⅱ和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣，在實驗區的外墻上和各
扇門上都安裝有風量可調的回風口，空氣通過回風口向室內換氣。
3、消毒：
在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準備區和標本制備區還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗：
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。
5、地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。考慮成本也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm。
6、照明
燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。

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