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質粒DNA蛋白細胞實驗過程與材料

來源:上海通蔚試劑專業供應商   2015年06月15日 06:17  

安裝16 cm 長的電泳玻璃板和1. 5 mm 厚的墊片。在40 ml 低離子強度凝膠混合液中加100 μl 30%的過硫酸銨及34 μl TDMED,灌入玻璃板之間,插入齒寬≥7 mm 的梳子。讓膠聚合20 min。將梳子和底邊的墊片取出。將膠放入盛有低離子強度電泳緩沖液的電泳漕中,用雙頭泵以5~30 ml/min 循環電泳緩沖液。
在微量離心管中,加終體積15 μl 的下列成分:10 000 c/min 的DNA探針,終濃度300 μg/ml BSA,及取自緩沖液中的粗制蛋白提取物中的大約15 μg 蛋白質?;靹颍?0℃水浴15 min。在1個加樣孔加入少量10×加樣緩沖液并讓染料跑進膠。在其他孔中加各結合反應液,在約30~35mA下電泳,直至溴酚藍(相當于約70 bp 的條帶)達到膠底。
卸下凝膠電泳裝置,撬開電泳玻璃板,將粘附了凝膠的玻璃板平放在實驗臺上,在膠上放置3張Whatman 3MM濾紙。將濾紙連同凝膠一起揭下。用塑料薄膜包裹凝膠進行真空干燥。在不使用增感屏的條件下,凝膠膜放射自顯影,或用增慼屏放射自顯影2~3 h。DNA復合物的清晰電泳條帶。
實驗材料        質粒DNA
試劑、試劑盒    dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙錠TEMED過硫酸銨BSA

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