在細胞培養過程中，經常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養條件中，若加入HEPES，可防止培養基內pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。 HEPES分子量為238.31，分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

HEPES使用方法有兩種：

 (1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養液中，再過濾除菌。每1000ml培養液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。

(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養液加入 lml貯存液，zui終應用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。現在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據實際情況正確靈活配制就OK了。