間接法（測抗體）

雙抗體夾心法（測抗原）

競爭法（測抗原）

抑制性測定法

1

包被抗原：用包被緩沖液稀釋抗原至zui適濃度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反應板每個凹孔中,4℃過夜或37℃水浴2～3小時,貯存冰箱

包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至zui適濃度（1～10μg /ml），每凹孔加0.3ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱 

 
包被特異性抗體：

同左

 
包被抗原：

同左

 2

 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘

 同左

 同左

 同左

 3

 加被檢標本：每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各0.2ml，37℃，作用1～2小時

 每凹孔加入0.2ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標本，37℃作用1～2小時。

 分2組,a組加酶標記抗原和被檢抗原混合液0.2ml，另一組只加酶標記抗原液0.2ml，37℃作用1～2小時。（混合液可作成不同稀釋度）。

 a組加參考抗體和被檢抗原混合液0.2ml，另一組加參考抗體與等量稀釋劑0.2ml，37℃作用1～2小時。

 4

 洗滌：重復2

 同左

 洗滌：同左

 洗滌

 5

 加入酶結合物：每凹孔加入稀釋緩沖液稀釋的酶結合物0.2ml。37℃作用1～2小時

 加入0.2ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標記特異性抗體溶液，37℃作用1～2小時或由預試實驗確定作用時間。

 ——

 各加入0.2ml抗參考抗體的酶結合物37℃作用1～2小時。

 6

 洗滌：重復2

  同左

 ——

 洗滌

 7

 加入0.2ml底物溶液于每個凹孔,（O.P.D或O.T），室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4ml底物加0.1ml終止劑）。

 同左

 同左

 同左

 8

 加終止劑：每凹孔加2M H₂SO₄或2M檸檬酸0.05ml。

 同左

 同左

 同左

 9

 觀察記錄結果：目測或用酶標比色計測定（O.P.D用492nm）O.D值。

 同左

 用酶標比色計測定a、b兩組O.D值，并求出a、b、O.D值的差數。

  同左